[发明专利]转化寇氏隐甲藻的方法有效
| 申请号： | 201310302810.8 | 申请日： | 2013-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN104293824B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 戴小军;许骏;蔡南海;姜翠红 | 申请（专利权）人： | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12R1/89 |
| 代理公司： | 72001 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 李波;万雪松 |
| 地址： | 200137 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转化 寇氏隐甲藻 方法 | ||
1.转化寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
在渗透压调节剂的存在下悬浮寇氏隐甲藻及根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)；
将完整的寇氏隐甲藻细胞与重组根癌农杆菌共培养；和
获得根癌农杆菌转化的寇氏隐甲藻，
其中，所述渗透压调节剂导致的渗透压相当于浓度是100mM-700mM的氯化钠导致的渗透压，并且所述渗透压调节剂选自钠盐、镁盐、钾盐、钙盐或糖、醇类有机物。
2.一种制备转基因寇氏隐甲藻(Crypthecodinium)的方法，其特征在于，所述方法包括在渗透压调节剂的存在下，使用含有目标基因的重组根癌农杆菌转化完整的寇氏隐甲藻，其中，所述渗透压调节剂导致的渗透压相当于浓度是100mM-700mM的氯化钠导致的渗透压，并且所述渗透压调节剂选自钠盐、镁盐、钾盐、钙盐或糖、醇类有机物。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、葡萄糖和山梨醇。
4.权利要求2所述的方法，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、葡萄糖和山梨醇。
5.权利要求3的方法，其特征在于所述渗透压调节剂导致的渗透压相当于浓度是200mM-400mM的氯化钠导致的渗透压。
6.权利要求4的方法，其特征在于所述渗透压调节剂导致的渗透压相当于浓度是200mM-400mM的氯化钠导致的渗透压。
7.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻和/或所述根癌农杆菌经预培养处理。
8.权利要求2所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻和/或所述根癌农杆菌经预培养处理。
9.权利要求7所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻和所述根癌农杆菌预培养至对数期。
10.权利要求8所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻和所述根癌农杆菌预培养至对数期。
11.权利要求9所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻为预培养到对数初期的寇氏隐甲藻。
12.权利要求10所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻为预培养到对数初期的寇氏隐甲藻。
13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其特征在于，在寇氏隐甲藻细胞与根癌农杆菌共培养时添加乙酰丁香酮。
14.权利要求1-12的任一项所述的方法，其特征在于，所述寇氏隐甲藻选自ATCC30772、ATCC 40750、TEX L 1649、ATCC 30556、ATCC 50051、UTEX L 1649、RJH、CCMP 316、ATCC 50297、ATCC30556；所述根癌农杆菌选自：根癌农杆菌EHA105、EHA101、LBA4404、AGL-0、AGL-1、NT1、C58-Z707和GV3101::pMP90。
15.权利要求1-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括获得根癌农杆菌转化的寇氏隐甲藻的步骤。
16.权利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法还包括获得根癌农杆菌转化的寇氏隐甲藻的步骤。
17.权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法还包括获得根癌农杆菌转化的寇氏隐甲藻的步骤。
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