[发明专利]一种制备β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂的方法

权利要求书

1.一种制备β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1、先将能诱导产生β-葡萄糖醛酸苷酶的菌株Penicillium purpurogenum Li-3接入到斜面培养基上，经培养后得斜面种子，其中Penicillium purpurogenum Li-3的保藏号为CGMCCNo.5446；

步骤2、将步骤1所得的斜面种子接入种子培养基中，经培养后得到种子液；

步骤3、将步骤2所得的种子液接入到含有甘草酸或甘草酸盐的产酶培养基中，其中产酶培养基中含有外源促进剂，促进Penicillium purpurogenum Li-3诱导产生β-葡萄糖醛酸苷酶，其中外源促进剂为从甘草中提出的甘草总提取物、甘草总黄酮和/或甘草总多糖；

步骤4、从步骤3中获得β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，步骤3中产酶培养基的碳源为甘草酸或甘草酸盐，加入外源促进剂，其中外源促进剂为甘草总提取物、或甘草总多糖和/或甘草总黄酮，产酶培养基浓度（g/L）为：甘草酸或其盐0.1～20，外源促进剂0.1～20，其它培养基为NH₄NO₃0.01～10，KH₂PO₄0.01～5，KCl0.01～3，MgSO₄·7H₂O0.01～3，FeSO₄·7H₂O0.0001～1，控制pH2.0～10.0，温度115～125℃，15～30min灭菌后，冷却至室温。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，产酶培养基含有0.1～20（g/L）的外源促进剂。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于：步骤3中产酶培养为在摇瓶或发酵罐中培养，将二级种子液按照体积比1～30％的接种量接入到产酶培养基中，摇床培养过程中控制转速为100～400r/min，温度15～65℃，培养时间12～120h，发酵罐发酵过程中控制转速为100～400r/min，通气比为0.1～10vvm，发酵温度15～65℃，溶氧为10～100％，pH为2.0～10.0，发酵时间24～240小时。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，将步骤4中产生β-葡萄糖醛酸苷酶的菌体及其发酵液制备成β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂,包括以下一种或几种：(a)含有已经产酶菌体的发酵液的组分、（b）已经产酶的菌体发酵液离心后获得的全细胞菌体、（c）已经产酶的菌体破碎细胞后制得的粗酶液、（d）已经产酶的菌体冷冻干燥后制得的冻干粉、（e）含有固体培养和/或半固体培养所产生的β-葡萄糖醛酸苷酶的组分。