[发明专利]一种具有辅助性别鉴定的法医DNA检测试剂盒及其鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于法医DNA检测领域，具体是涉及一种通过用内标染料标记性别鉴定基因座引物，实现在内标中检测性别的方法。

背景技术

法医DNA检测目前采用多色（四色、五色、六色）荧光复合扩增13-30个STR基因座，并且同时检测性别鉴定基因座，牙釉质蛋白基因Ameloginen，如表1所列产品及专利。

法医检测DNA试剂盒分为两部分，一部分称为扩增前试剂盒，包括复合扩增的引物（引物用与标记内标不同的染料标记），用于PCR扩增；一部分称为扩增后试剂盒，包括分子内标及等位基因标准物，用于产物的扩增之后的毛细管电泳检测。如表1所列的及还有未列出的法医DNA检测试剂盒，扩增前的荧光与内标的荧光都是不同的，没有用标记内标的染料标记扩增用的引物。

在扩增前试剂盒部分，都包含一个鉴定性别的基因组，牙釉质编码基因Ameloginen。Amelogeninen（牙釉质蛋白基因）位于X和Y染色体上，编码原牙釉质蛋白。X染色体的Amelogenin gene位于Xp22, Y染色体上位于Y11p22.2, 由于Amelogenin X和Amelogenin Y上碱基缺失片段长度不同，根据碱基部位两侧的同源序列的碱基排列顺序设计出引物以同步扩增X、Y特异性片段进行性鉴定。该法广泛用于法医DNA STR多态性检测试剂系统中，成为法医DNA检测性别鉴定的常规方法。正常情况下，女性Ameloginen基因只有一个扩增峰，男性有两个扩增峰。Shewale et al.在2000年发现7000男性中有3人的Amelogenin Y丢失，扩增结果表现为单峰，易误判为女性。在美国AB公司的AmpFlSTR GlobalFiler及美国Promega公司的 PowerPlex Fusion中，增加了一个辅助性别鉴定的DYS391基因座。DYS391是Y染色体特异的基因座，当样本为男性时，有扩增峰。这样即使有Amelogenin Y丢失的男性个体，仍有DYS391扩增，不会造成性别的误判。

法医DNA检测中，性别的判断对于案件方向影响重大，所以增加辅助检测性别的基因座非常重要。遗憾的是中国DNA数据库没有收录Y染色体中的基因座，造成AmpFlSTR GlobalFiler试剂盒、PowerPlex Fusion试剂盒的扩增包含DYS391、Y indel Y染色体基因座的分析数据无法入库。

表1 法医DNA检测试剂盒及对应性别鉴定基因座

目前在法医DNA检测中，分子量内标（简写内标）是用一种荧光标记的一系列大小不同的已知大小的DNA片段。内标作为试剂盒扩增后的组成部分，在电泳中与扩增产物一起电泳，通过片段的出峰时间及标定的大小，指示扩增产物的大小。

Genemapper（AB公司发布专门用于数据分析的软件）首先自动对内标进行分析评价，质量用SQ（Qizing Quality）的大小来表示。SQ质量大于0.70表示质量好。图1是内标的电泳分析图谱，这个内标是AGCU SIZ-500（无锡中德美联生物技术有限公司有售，用专利ZL200810116622.5的荧光染料及标记方法标记），由长度分别为75bp，100bp，139bp，150bp，160bp，200bp，250bp，300bp，340bp，350bp，400bp，450bp，490bp及500bp的14个SIZ标记的片段组成。

发明内容

解决的技术问题：针对现有技术中的试剂盒与鉴定方法中，扩增染色体基因座的分析数据无法入中国DNA数据库的技术问题，本发明提供了一种具有辅助性别鉴定的法医DNA检测试剂盒，或在法医DNA检测试剂盒上增加辅助性别鉴定的方法，通过这样的改进，在法医DNA检测中，可以辅助性别鉴定，又不影响数据库入库。

技术方案：

本发明用专利ZL200810116622.5，标记一对特异性扩增Y染色体片段的引物，加入到复合扩增体系中，扩增片段的大小不与任何一个内标相同。具体方案如下：

本发明提供一种具有辅助性别鉴定的法医DNA检测试剂盒，包含法医DNA检测试剂盒的扩增体系，其特征在于：还包含SIZ标记引物，用以扩增Y染色体上SRY区域中的一段片段，此处SRY区域是男性Y特异的区域，包括M175，SRY等几百个可被扩增的基因座。

作为本发明的进一步改进，上述Y染色体上SRY区域中的一段片段为M175，SRY基因座。

作为本发明的更进一步改进，

用以扩增上述M175基因座的SIZ标记引物序列为