[发明专利]一种大豆抗疲劳生物活性肽的制备

说明书

技术领域

本发明属于植物蛋白的提取加工技术，主要涉及一种大豆抗疲劳生物活性肽的制备。

背景技术

大豆经过压榨或浸提后的豆粕含有45%左右的蛋白质。大豆蛋白中氨基酸的含量较为均衡，除蛋氨酸含量略低外，其他人体所必需的氨基酸含量均较高。目前豆粕主要用于饲料，这样大大浪费了大豆蛋白资源，所以需要通过生物技术等方法使豆粕中的大豆蛋白得到充分利用。大豆肽即大豆蛋白经酶水解后得到的相对分子质量在5 000以下的低聚肽混合物，其氨基酸的组成与大豆蛋白基本相同，其中必需氨基酸含量丰富。大豆肽具有易消化吸收、液体黏性小、持水性好、营养全面和受热不凝固等诸多特性，尤其是具有抗氧化、抗疲劳增强肌肉运动能力等非特异性作用。

目前有关大豆肽体外抗氧化能力已经被人们所认可，但在国内关于大豆肽在体内抗氧化能力的研究很少，而且有关大豆肽抗疲劳能力的研究也很少。已有研究者证实利用抗氧化物质饲喂实验小鼠具有抗疲劳的功效。目前大豆抗疲劳活性肽的制备大多数采用酶解水解法，几乎没有采用超声波辅助酶解制备抗疲劳活性肽。现有的制备抗疲劳活性肽技术存在成本高，产品的抗疲劳活性低、纯度低等问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种大豆抗疲劳生物活性肽的制备方法，达到提高产品抗疲劳活性的目的。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种大豆抗疲劳生物活性肽的制备，以高变性豆粕为原料，加水配成底物浓度为6-10%的混合液，将混合液进行超声预处理，所述的超声功率300-500W，超声时间10-30min，超声温度45-55℃；向处理后的混合液中加入中性蛋白酶进行酶解，得到酶解液，所述的酶解时间3-5h，加酶量28000-36000U/g底物；酶解后采用膜分离技术对酶解液进行超滤处理，得到肽含量高、分子量小于5 kDa生物活性肽，后采用阴离子交换层析及反相高效液相色谱进行分离纯化，最后冷冻干燥得到大豆抗疲劳生物活性肽。

所述的最优底物浓度为8%。

所述的超声预处理优选参数为：超声功率390W，超声时间12min，超声温度48℃。

所述的酶解工艺优选参数为：酶解时间4h，加酶量32000U/g底物。

本方法以高变性豆粕为原料，采用超声辅助酶解法制备大豆抗疲劳生物活性肽。由于超声波的空化效应和强化传质作用，使蛋白质的结构改变，利于后续酶解。纯化的产品能够使小鼠运动后具有较高的抗氧化酶活性和较低的丙二醛（MDA）含量，结果说明大豆肽通过清除体内产生的自由基和抑制脂质过氧化物的生成，减少因脂质氧化带来的细胞损伤，起到抗疲劳作用。

附图说明

附图 本发明总工艺路线图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明具体实施例进行详细描述，

一种大豆抗疲劳生物活性肽的制备，以高变性豆粕为原料，加水配成底物浓度为6-10%的混合液，将混合液进行超声预处理，所述的超声功率300-500W，超声时间10-30min，超声温度45-55℃；向处理后的混合液中加入中性蛋白酶进行酶解，得到酶解液，所述的酶解时间3-5h，加酶量28000-36000U/g底物；酶解后采用膜分离技术对酶解液进行超滤处理，得到肽含量高、分子量小于5 kDa生物活性肽，后采用阴离子交换层析及反相高效液相色谱进行分离纯化，最后冷冻干燥得到大豆抗疲劳生物活性肽。

所述的最优底物浓度为8%。

所述的超声预处理优选参数为：超声功率390W，超声时间12min，超声温度48℃。

所述的酶解工艺优选参数为：酶解时间4h，加酶量32000U/g底物。

 

实施例1：超声预处理最佳参数的筛选试验

1 材料与方法

1.1 材料、试剂

1.2 主要仪器设备

1.3 试验方法

1.3.1 工艺流程

高变性豆粕→加水配成溶液→超声预处理→酶解→灭酶→冷却→调pH酸性→离心→上清液→冷冻干燥→抗氧化活性肽

1.3.2 二苯代苦味酰基（DPPH）自由基清除率的测定