[发明专利]独一味中五种苯丙素苷类单体化合物的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、alyssonoside、异毛蕊花糖苷和leucosceptoside B五种苯丙素苷类单体化合物的制备方法，尤其涉及独一味中五种苯丙素苷类单体化合物的分离制备方法。

背景技术

藏药独一味(Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo)为唇形科独一味属植物，藏语称“大巴”、“打布巴”，生长于海拔3000m以上的碎石滩中，分布在甘肃南部、青海东南部、四川西北部、云南西北及西藏大部，其根及全草入药，是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用药之一。最早收载于1200多年的藏族医学巨著《四部医典》、《晶珠本草》中。《藏药志》记载，独一味有治浮肿后流黄水，关节积黄水、骨松质发炎、跌打损伤、筋骨疼痛和风湿关节痛等症。2005版《中国药典》收载了药材及其制剂独一味胶囊，具有活血止痛、化瘀止血之功效，用于治疗各种外科手术后的刀口疼痛、出血、外伤骨折等。现代药理学研究表明，该药具有镇痛、抗炎、镇静、改善微循环、抗胖瘤和扩张血管的作用，具有良好的利用价值和开发潜力。化学成分研究表明，植物中所含化学成分类型主要有苯丙素苷、环烯醚萜苷和黄酮等。

目前，世界上有多家实验室在从事苯丙素苷类化合物的提取分离、结构鉴定以及对其生物活性的测定研究工作。研究表明苯丙素苷类化合物具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、保肝护肝和碱基修复作用，对于糖尿病及相关疾病，以及对由于身心压力所致的性功能障碍，学习、记忆能力低下等都具有明显的改善作用。人类所患的许多无法治愈的疾病均是人体自我免疫调节系统失控所造成的，而苯丙素苷类化合物对此显示出良好的改善作用。

高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)是不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，具有应用范围广，适应性好；操作简便，容易掌握；回收率高；重现性好；分离效率高，分离量较大的优点。与其它柱色谱相比较，它克服了固相载体对样品的吸附损失、变性、污染和峰形拖尾等缺点，样品回收率高，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。国内外的研究表明，HSCCC技术已经从农产品、中草药等天然产物中分离纯化与制备了数百种单体成分，这些成分包括黄酮类、生物碱类、蒽醌类、皂苷类、大环内酯类、多酚类、儿茶素类、多糖类、糖蛋白类等物质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简便、快速、成本低廉的独一味中五种苯丙素苷类单体化合物的分离制备方法。

为解决上述问题，本发明所述的独一味中五种苯丙素苷类单体化合物的分离制备方法，包括以下步骤：

⑴将粉碎的独一味全草采用质量浓度为45%~75%的酒精在50~80℃下进行热回流提取，提取2~4次、每次1~3h，合并得到提取液；

⑵将所述提取液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得独一味提取物；

⑶将所述独一味提取物先用去离子水溶解，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4~6次，得到正丁醇萃取液；该正丁醇萃取液在温度为65~75℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得正丁醇萃取物；

⑷将所述正丁醇萃取物溶于其质量20~30倍的水中，并上D101大孔树脂柱，用4~6倍柱床体积、质量浓度为30~50%乙醇水溶液洗脱，得到含有苯丙素苷类物质的洗脱液；

⑸所述含有苯丙素苷类物质的洗脱液在温度为55~65℃、压力为0.06~0.08MPa的条件下蒸干至恒重，即得苯丙素苷粗提物；

⑹所述苯丙素苷粗提物采用高速逆流色谱设备，在乙酸乙酯-正丁醇-水体系中以转速为800~1000r/min、流速为1.5~4.5 mL/min、温度为25~45℃的条件对其进行分离，即可分别得到纯度为95.2~97.7%的连翘酯苷B、纯度为96.1~99.2%的毛蕊花糖苷、纯度为96.1~99.5%的alyssonoside、纯度为97.2~99.3%的异毛蕊花糖苷和纯度为93.4~97.3%的leucosceptoside B。

所述步骤⑶中独一味提取物与所述去离子水的质量体积比为1：1~5。

所述步骤⑹乙酸乙酯-正丁醇-水体系中乙酸乙酯、正丁醇、水的体积比为12~13：3~4：10。

本发明与现有技术相比具有以下优点：