[发明专利]龙须菜试剂级R‑型藻红蛋白的高效分离纯化方法有效
| 申请号： | 201310306723.X | 申请日： | 2013-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN104292316B | 公开（公告）日： | 2017-03-29 |
| 发明（设计）人： | 刘冰;杜虹;谷洋洋;秦松;陈洁辉 | 申请（专利权）人： | 中国科学院烟台海岸带研究所;汕头大学 |
| 主分类号： | C07K14/405 | 分类号： | C07K14/405;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司21002 | 代理人： | 周秀梅,李颖 |
| 地址： | 264003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 龙须菜 试剂 型藻红 蛋白 高效 分离 纯化 方法 | ||
1.一种龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：将粉碎的原料大型经济海洋红藻龙须菜加入其10-30体积的PBS缓冲液中浸泡，浸泡后以9000rpm/min-15000rpm/min离心20-30min，收集上清液进行浓缩；浓缩液经硫酸铵进行分级盐析，收集沉淀并用PBS缓冲液溶解，溶解后进行透析24-48小时；所得透析液经强阴离子Source-15Q层析柱纯化，以含不同浓度NaCl的PBS缓冲液作为洗脱液进行梯度洗脱，流速0.5ml/min,收集第360min-510min的洗脱液，即为纯度大于5.0的R-型藻红蛋白溶液。
2.按权利要求1所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：所述原料大型经济海洋红藻龙须菜。
3.按权利要求1所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：将原料大型经济海洋红藻龙须菜粉碎至粒径0.1-0.5mm，粉碎后加入至其10-30体积的PBS缓冲液中，在4℃下，浸提24-48小时，浸提液再于4-8℃，以9000rpm/min-15000rpm/min条件下离心20--30min，离心后上清过滤，滤液用50kd的浓缩板浓缩，待用。
4.按权利要求1或3所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：所述PBS缓冲液为50-100mM/L PBS缓冲液pH6.0-7.0。
5.按权利要求1所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：所述浓缩液中加入硫酸铵使其饱和度达到25-35%，并静置12-15个小时，静置后于4℃，12000rpm/min-15000rpm/min条件下离心20-30min，收集上清；上清液中再加入硫酸铵使其饱和度达到45-60%，静置6-12小时，而后于4℃，12000rpm/min-15000rpm/min条件下离心20-30min，收集沉淀，待用。
6.按权利要求1所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：所述洗脱液为0-0.6M NaCl的1mM/L-25mM/L，pH6.0-7.0PBS缓冲液。
7.按权利要求1所述的龙须菜试剂级R-型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：所述强阴离子Source-15Q层析柱规格1.6×20cm，柱床高度6-8cm，平衡和洗脱的流速均为0.5-1.0ml/min，洗脱总体积为400-500ml。
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