[发明专利]猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗，还涉及一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗的制备方法，还涉及一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗的应用。本发明制备三联灭活疫苗主要适用于母猪，公猪及仔猪，具有良好的免疫效果。 

技术背景

猪圆环病毒2型感染是造成断奶猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要原因，其它协同因素可增强疾病的严重程度。猪圆环病毒病可引起感染猪只消瘦、生长缓慢，饲料报酬降低；同时由于该病是免疫抑制疾病，机体免疫防御功能降低，致使临床上常常发生混合感染，产生所谓的各种综合征，增加疾病控制的难度。 

猪链球菌和副猪嗜血杆菌均是条件性致病菌，在机体免疫力降低的情况下容易导致疾病的发生，往往造成机体的混合感染。 

猪链球菌是引起猪链球菌病的重要致病性细菌，共有33种血清型，其中猪链球菌2型可引起猪急性败血症、脑膜脑炎、关节炎和急性死亡，也可导致生猪从业人员中的特定人群感染和死亡（J Clin Microbiol,2002,40(8):2922～2929.）。2005年6～8月，四川省资阳市、内江市等地区暴发了猪链球菌2型病，并导致204人感染，38人死亡（畜牧兽医学报,2007,38(4):367～381.）。 

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）能引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎，可以影响从2周龄的哺乳仔猪到4月龄的育肥猪，主要在断奶后和保育阶段发病，多见于5～8周龄的猪，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率高达50%。其易与猪链球菌、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒、肺炎支原体以及其它病原发生混合或继发感染，而且据多篇文献报道，副猪嗜血杆菌病容易被误诊（华中农业大学学报,2005,24(1):55～58）。因此，在临床上控制副猪嗜血杆菌病不仅对该病本身、也有利于其它疾病的控制，进而为提高猪群整体健康水平提供了保障。 

目前，市面上使用的疫苗只有单独预防猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病和猪圆环病的灭活疫苗。同时预防猪链球菌病，副猪嗜血杆菌病和猪圆环病的灭活疫苗，国内外还未见报道。而且，国内细菌性疫病主要是用抗生素防治，由于抗生素的滥用，导致了耐药菌株的产生， 使药物治疗趋向无效；抗生素药物的残留导致了严重的食品安全问题；而且猪圆环病毒容易造成机体的免疫抑制，这增加了机体的混合感染几率，特别是猪链球菌和副猪嗜血杆菌的继发感染。因此，使用疫苗来预防猪圆环病毒病，猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病不仅仅可以控制机体的混合感染，也是当前最经济、最有效的方法。 

因此，市场上急需发明一种新的能同时预防猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病的三联灭活疫苗，以解决上述问题。本公司经大量试验后，研制出了该三联灭活疫苗，试验结果证明本疫苗效果良好。 

发明内容

本发明的目的在于提供了一种猪圆环病毒2型-WH株，该毒株于2013年7月19日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏，分类命名：猪圆环病毒2型-WH株Porcine circovirus2-WH，CCTCC NO：V201333。该病毒毒力强、免疫原性好，在体外培养时病毒含量高。 

本发明还有一个目的是在于提供了一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗，该疫苗能同时有效预防猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病，而且只需一针免疫，减少了猪只的应激，降低了成本。临床上达到―一针多防‖的效果，而且不存在散毒的隐患，安全可靠。 

本发明的另一个目的是在于提供了一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗的制备方法，该方法制备的疫苗产生的抗体水平高、持续时间长，并且不存在散毒的隐患。 

本发明的还有一个目的是在于提供了一种猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗在制备预防猪圆环病毒病药物中的应用。该方法制备的疫苗中猪圆环病毒抗原滴度高，病毒毒价可达到10^7.4TCID₅₀/ml，免疫原性好，对猪圆环病毒病具有良好的免疫保护效力。 

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施： 

猪圆环病毒2型的分离、筛选和鉴定 

1.1病毒的分离培养