[发明专利]用于测定造血干细胞移植后患者骨髓微环境的试剂盒、系统及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种特殊应用环境中使用的细胞表型专用试剂盒及系统，具体涉及一种用于测定造血干细胞移植后患者骨髓微环境评测的试剂盒、测定系统及实现定性定量分析的方法。 

背景技术

异基因造血干细胞移植是治疗血液恶性疾病的有效方式之一，但是移植后植入不良（英文名称Poor Graft Function，缩写PGF）的发生率在5-27%之间，仍然是异基因造血干细胞移植后的主要并发症之一，严重时影响移植患者的长期生存。尽管文献报道，植入不良可能与移植前预处理剂量、免疫排斥、移植物抗宿主病、病毒感染、移植的CD34⁺细胞数等诸多因素有关，但移植后植入不良的发病机制尚未阐明，骨髓微环境在特定的植入条件下是否在与后期并发症具有重要内在联系尚未明确的研究结果。 

采用骨髓细胞体外长期培养实验和集落形成实验是替代体内研究来评估血液病患者骨髓基质细胞造血支持作用的常用方法。既往研究借助于上述研究方法证实，接受长期化疗的血液病患者骨髓基质细胞受损，接受自体造血干细胞移植的患者在移植前和移植后1年均可检测到骨髓基质细胞受损。我们由此推测骨髓微环境受损也可能参与了造血干细胞移植后植入不良的发生。但是骨髓细胞体外长期培养实验和集落形成实验具有一定的局限性：其目标细胞群包括成纤维细胞、脂肪细胞和内皮细胞等一组异质性的骨髓基质细胞组分。特别是在造血干细胞移植后的早期，患者体内重建的骨髓基质细胞数量很少，严重限制了上述研究方法的推广应用。因此，迫切需要建立新的、方便快捷的检测方法对造血干细胞移植后血液病患者的骨髓微环境组分进行有效性评估。这涉及到造血干细胞移植后植入不良能否及时预测以及临床治疗方案的制定是否更加科学、高效与个体化。 

对于血液病患者来讲，骨髓配对找到合适的骨髓捐献者本来就是十分不易之事，如果因为某种因素延误了后期的治疗与恢复，浪费了宝贵的社会资源，则是医学界的悲哀。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于测定造血干细胞移植后血液病患者骨髓微环境的试剂盒、系统及方法，利用该试剂盒中经过精确标定和定量的专用试剂、配套的设备系统及技术操控方法，可以快速、准确地测定CD45^–CD34^–CD146⁺细胞在骨髓单个核细胞中所占比例，从而得出造血干细胞移植后血液病患者骨髓微环境品质的定性和定量结论，从而可以快速、准确地预测造血干细胞移植后血液病患者植入不良的发生，对临床治疗方案的制定具有重要的指导意义。 

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案1是： 

提供了一种测定造血干细胞移植后患者骨髓微环境评测的试剂盒，该试剂盒的应用基于流式细胞仪，该试剂盒中配置了下述荧光标记的单克隆抗体试剂：CD34-FITC、CD146-PE、CD45-PerCP和CD133-APC。

采用上述试剂盒与流式细胞仪配合使用，可以准确、定量测定CD45^–CD34^–CD146⁺细胞在骨髓单个核细胞中的表达比例，为骨髓微环境的评测奠定了基础。 

本发明还提供了一种基于上述试剂盒的专用系统，该系统的结构中包括流式细胞仪和配套的数据分析模块，所述系统中还包括主控计算机单元，以及连接在主控计算机单元配套接口上的存储有主控程序的系统管理模块、配置缓存器模块的监控显示器LCD、存储有经验数据和图形的存储模块、暂存器模块、设置在系统操控台上的操控面板、存储有内外数据通讯协议和数据规格转换模式的通讯模块、打印机及接口电路，流式细胞仪通过通讯接口电路和主控计算机单元的数据总线连接，且流式细胞仪结构中配套设有用于测定造血干细胞移植后患者骨髓微环境评测的专用试剂盒，所述专用试剂盒中配置了下述荧光标记的单克隆抗体试剂：CD34-FITC、CD146-PE、CD45-PerCP和CD133-APC。 

本发明的关键技术在于借助主控计算机系统的完善配备和针对性任务明确的控制方法与配套软、硬件的配套，将关键的采样设备——流式细胞仪改造成为造血干细胞移植后血液病患者骨髓微环境评测报告专用的系统装备。流式细胞仪的用途是测定带有荧光标记的骨髓样本，记录二维散点图。但是，被测定细胞特异性内涵的定性和进一步定量分析，流式细胞仪和配套的分析软件是无能为力的。特定任务的实现，取决于染色标记的选配是否合理，前瞻性研究的定标分界线值的选取是否的具有普遍性以及操作方法是否能为临床的结果所验证。