[发明专利]油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和应用

说明书

(一)技术领域：本发明属于天然产物制药技术领域，具体涉及油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和在制备治疗和预防前列腺增生、前列腺炎症药物中的应用。

(二)背景技术：前列腺是男性体内比较小的一个器官，成人仅类似栗子大小，但是几乎所有的成年男性一生中都会受其影响，最常见的前列腺疾病为前列腺炎和良性前列腺增生。其中，儿童较少发生前列腺疾病，青壮年和老年人发病率则较高，且随着年龄的不同，发生病种也不同；如前列腺炎好发于青壮年，35岁以上男子的发病率可达35%-40%；良性前列腺增生是常见的老年男性多发病，60-69岁的老年人发病率可达50-60%，70-80岁的老年人发病率则高达80%以上。

目前，国内外对前列腺炎的治疗手段以氨苄西林、红霉素等抗生素治疗为主，但许多抗生素药物难以进入到前列腺里面或难以在前列腺内形成有效的抑菌浓度，且对衣原体、支原体等病菌几乎无效。抗前列腺增生常采用坦洛新等α1-肾上腺素受体阻滞剂和非那雄胺等5α-还原酶抑制剂，当前列腺增生达到一定程度时，则采用手术方法去除增生组织；但坦洛新等并不能缩小增生的前列腺，只能临时扩张尿道，解决症状，而非那雄胺虽然可以缩小前列腺增生，但存在性功能障碍等不良反应。市场上还有部分中成药(如前列倍喜等)、天然植物药(如舍尼通等)用于治疗前列腺炎、前列腺增生，但这些药物起效慢，临床疗效个体差异大。

现代研究表明，油菜花粉含有多糖、甾醇、脂肪酸、黄酮等多种有效成分，在营养保健和药品中广泛应用。近年来流行病学研究表明，油菜花粉中的植物甾醇具有良好的抗前列腺增生、前列腺炎作用。如Berges采用Boyarsky法、IPSS法以及尿流量、前列腺体积等多项指标，对甾醇的抗良性前列腺增生作用进行药效评价，结果显示植物甾醇具有良好的抗前列腺增生作用。另外，植物甾醇还有类似于氢化可的松、强的松等的较强的抗炎作用，以及对机体某些癌症的发生和发展有一定的抑制作用。目前国内临床上也广泛应用以油菜花粉为原料的制剂(如普乐安片、胶囊)于治疗慢性前列腺炎和前列腺增生。但由于花粉中有效成分含量低，前列腺炎、前列腺增生患者每日服用油菜花粉量大；且不同产地油菜花粉有效成分含量不均一，但中国药典2010版收载的普乐安片质量标准仅检测槲皮素和山奈酚的含量，缺乏其他指标，而目前的研究表明，抗前列腺增生和前列腺炎的有效成分主要为总甾醇物质，故其药物临床疗效不稳定，甚至部分药物无效。因此，建立一种有效控制油菜花粉中总甾醇化合物含量的提取工艺，并对其含量进行控制，是解决目前药物疗效不稳定的重要途径之一。

(三)发明内容：本发明的目的在于提供一种以油菜花粉为原料提取分离纯化得到总甾醇化合物含量为50%-90%(wt%)的油菜花粉总甾醇有效部位，还提供油菜花粉总甾醇有效部位在制备治疗和预防前列腺疾病药物中的应用。本发明所述的油菜花粉总甾醇有效部位总甾醇化合物为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇，其通过下述方法和步骤制得：

(a)有机溶剂提取：

将油菜花粉粉碎破壁，破壁率控制在90%以上，采用6-8倍体积量的75%-95%有机溶剂加热回流提取3-4次，每次1-3小时，将提取液浓缩成浸膏备用；所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇或丙酮中一种；所述的浓缩浸膏的相对密度为1.1-1.3（50℃）。

(b)硅胶层析等分离纯化

(Ⅰ)将步骤(a)制成的浸膏用甲醇溶解，加入层析硅胶拌样，硅胶的用量为与浸膏的重量比为1：1-2：1，将拌有样品的硅胶与层析硅胶按重量比1：4-1：10装柱；用有机溶剂第一组试剂中的石油醚或正已烷与第二组试剂中的乙酸乙酯或甲醇，按体积比10：0.5-10：5的混合溶剂洗脱至无色带流出，收集洗脱液，在50℃下浓缩成相对密度为1.1-1.3的浸膏备用；

(Ⅱ)取上述(Ⅰ)制备的浸膏加甲醇溶解制成供试品溶液，经C18反相中压制备色谱柱，采用10%-50%(vt%)的甲醇水溶液或10%-50%(vt%)的乙腈水溶液为流动相洗脱分离，同时使用紫外检测器在波长为210nm处检测，根据紫外检测器信号检测到有甾醇化合物出来时开始收集洗脱液直至结束，合并收集洗脱液，浓缩成稠膏；真空减压干燥，得到油菜花粉总甾醇有效部位。

所述的C18反相中压色谱柱的梯度洗脱体系10%-50%(vt%)的甲醇水溶液，或10%-50%(vt%)的乙腈水溶液。