[发明专利]一种杂交瘤细胞株、其产生的抗沙丁胺醇单克隆抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫化学技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、其产生的抗沙丁胺醇单克隆抗体及应用。

背景技术

沙丁胺醇(salbutamol,Sal)又名舒喘灵、索布氨，化学名为4-羟基-5-羟甲基-α-（叔丁胺）甲基苯乙醇胺，分子式C₁₃H₂₁NO₃，分子量239,是一种口服强效β2肾上腺素能兴奋剂。在人医和兽医临床中，β2肾上腺素能兴奋剂如克伦特罗、沙丁胺醇主要作为防治哮喘和支气管痉挛的药物使用。除此之外，这类物质还具有一定的营养重分配作用，常被用作促生长剂，用于猪、牛、鸡等畜禽的生产。但这种兴奋剂造成了20世纪90年代在西班牙、法国、意大利等发达国家一系列食物中毒事件的发生。

现有技术中，沙丁胺醇可以采用仪器分析。仪器分析依赖技术要求高、检测时间长、回收率低的仪器，成本高，检测结果可靠性不高。免疫分析技术中使用的抗沙丁胺醇单克隆抗体的特异性不高，与沙丁胺醇类似物克伦特罗的交叉反应率达到50.04%，与莱克多巴胺交叉反应达到50%，这类特异性不高的抗体限制了试剂盒的使用，即一旦检测为阳性结果，仍需要进一步确定是哪种物质超标。

发明内容

本发明的目的是提供产生抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株8D7，能够产生高特异性的抗沙丁胺醇单克隆抗体，生产效率高，成本低。

本发明的另一目的是提供杂交瘤细胞株8D7产生的抗沙丁胺醇单克隆抗体，该单克隆抗体具有较高的特异性、敏感性，与结构类似物克伦特罗、莱克多巴胺交叉反应率低。

本发明的再一目的是提供采用所述抗沙丁胺醇单克隆抗体检测样品中沙丁胺醇残留的方法，该方法简单，不需要采用有毒试剂。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种产生抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株8D7，其保藏号为CGMCCNo.7953。

一种由所述杂交瘤细胞株8D7分泌的抗沙丁胺醇单克隆抗体。

所述抗沙丁胺醇单克隆抗体在制备检测沙丁胺醇的酶联免疫试剂盒中的应用。

所述抗沙丁胺醇单克隆抗体在制备检测沙丁胺醇的胶体金试纸条方面的应用。

用于检测沙丁胺醇的酶联免疫试剂盒，含有所述抗沙丁胺醇单克隆抗体。

用于检测沙丁胺醇的胶体金试纸条，含有所述沙丁胺醇单克隆抗体。

一种检测样品中沙丁胺醇残留的方法，样品预处理后，采用所述抗沙丁胺醇单克隆抗体进行检测；所述预处理方法为：

（1）将待检样品切碎，

（2）向切碎后的待检样品中加入盐酸；

（3）对步骤（2）处理后的样品进行均质处理；

（4）将步骤（3）处理后的样品置于75-85℃处理8-15min；

（5）如果步骤（4）处理后的样品有浸出液，取浸出液进行检测；如果没有浸出液，离心后取上清进行检测。

步骤（2）中所述盐酸的浓度为8-15mM，每克样品中加入盐酸0.5-1.5毫升。

有益效果：本发明将沙丁胺醇的结构进行了改造，得到了半抗原，再与载体蛋白偶联合成了免疫原和包被原，该方法简单，免疫效果好。通过筛选，得到了杂交瘤细胞株8D7，能够高效、稳定分泌抗沙丁胺醇单克隆抗体，并且该单克隆抗体的效价高、特异性好、敏感性高，与克伦特罗、莱克多巴胺交叉反应率低，能够大量生产，可用于制备检测沙丁胺醇的酶联免疫分析法试剂盒、胶体金试纸条等免疫学检测试剂。采用本发明试剂盒或胶体金试纸条能快速且灵敏地检测尿液，肌肉及内脏中的沙丁胺醇药物残留。采用本发明抗沙丁胺醇单克隆抗体检测样品中沙丁胺醇残留，样品处理过程中不需要用到有毒试剂，并且操作简单。

附图说明

图1合成抗原的SDS-PAGE检测图，其中M：蛋白分子量标准；1：BSA；2：HSA；3：Sal-BSA；4：Sal-HSA；5：Sal-OVA；6：OVA。

图2纯化后抗沙丁胺醇单克隆抗体8D7’的SDS-PAGE检测图，其中泳道M：蛋白质分子量Markers；泳道1：抗沙丁胺醇单克隆抗体8D7’。

图3抗沙丁胺醇单克隆抗体8D7’亚型鉴定图。

图4抗沙丁胺醇单克隆抗体8D7’与沙丁胺醇标准品反应的标准曲线图。

保藏信息：

参椐的生物材料（株）：8D7；

分类命名：抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；