[发明专利]猴耳环提取物及其在制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及中草药猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.) 提取物的新用途。 

背景技术

众所周知，当前细菌耐药已成为全球范围的重大公共健康问题，抗生素的滥用是造成细菌耐药的重要原因。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，以下简称“MRSA”)具有多重耐药性并伴有高发病率和高死亡率，是导致坏死性肺炎、严重败血症、坏死性筋膜炎等疾病的重要致病菌，是医院感染和社区感染的重要病原菌之一，给临床治疗带来了极大的困难。MRSA对绝大多数的抗菌药耐药，甚至对目前临床抗耐药菌最为有效的万古霉素也开始出现耐药，一旦MRSA发展到对万古霉素普遍耐药的程度，感染MRSA的患者将面临无药可治的危险境地。因此，针对细菌耐药日趋严重的情况，寻找、开发具有抗耐药菌MRSA、对抗生素具有增敏作用的抗菌药物，刻不容缓。 

猴耳环为含羞草科猴耳环属植物猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)的干燥幼枝及叶，是两广地区常用的中草药，用于治疗上呼吸道感染、急性咽喉炎、细菌性痢疾等疾病。目前有文献公开猴耳环的水及乙醇的单纯提取液具有抗病毒作用，但对上述提取液的其他用途或其他方法制备的提取物的药物应用则没有报道。 

发明内容

本发明的目的是开发猴耳环在制药领域上的新用途。 

目的之一是，将猴耳环水或乙醇或乙醇水溶液提取物用于制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物和抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌增敏药物。 

目的之二是，进一步优化猴耳环水或乙醇或乙醇水溶液提取物，开发活性更强的提取物。 

目的之三是，公开上述提取物的制备方法。 

本发明的技术方案： 

一、本发明所述猴耳环提取物的制备方法，包括以下步骤： 

1.取猴耳环药材，用水或乙醇或乙醇水溶液提取，回收溶剂得浸膏，制得猴耳环水提取物或乙醇提取物或乙醇水溶液提取物。 

2.上述浸膏加水稀释，再用石油醚或乙酸乙酯或正丁醇萃取，取萃取液浓缩分别制得对应的猴耳环提取物。此提取物的成分进一步优化，其药效明显提高。制备中涉及的药材重量与溶剂体积比的单位，药材重量以克计，溶剂体积以毫升计。 

二、将上述猴耳环提取物作为活性成分应用于抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物的制备。 

三、将上述猴耳环提取物作为活性成分应用于抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌增敏药物制备。特别是作为红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA组合药物的增敏剂。 

本发明通过对猴耳环进行提取和分离，对各提取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的药理作用进行筛选，并进行联合药敏试验，来考察猴耳环抗MRSA及其对抗生素抗MRSA的增敏作用。实验结果显示：猴耳环水、10%乙醇、 30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇提取物及相应乙酸乙酯、正丁醇和水层萃取物均具有较强的抗MRSA作用，其中猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物活性最强，相对于不经萃取的水提取物的抗菌作用强4倍；猴耳环60%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗MRSA具有增敏作用。 

本发明通过下述方法对猴耳环提取物的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药理作用进行筛选。 

以微量肉汤稀释法测定猴耳环提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。 

菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，编号为M1-M20)临床分离株20株；金黄色葡萄球菌标准菌株(Sa，ATCC25923)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供，经中山大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。 

MH肉汤培养基：MH肉汤干粉(英国 OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NaOH调节pH至7.0，高压灭菌，置4℃冰箱备用。 

方法：参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。 

本发明通过下述方法对猴耳环提取物对红霉素、头孢曲松钠、左氧氟沙星抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的增敏作用进行考察。