[发明专利]乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及乳腺癌细胞，尤其是涉及乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2及其应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2011年美国CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2011年预计将有230480例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的30%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达39520例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。乳腺癌的诊断方法主要包括乳腺钼靶X线摄影、乳腺彩色多谱勒超声检查、乳腺导管内视镜检查、乳腺导管灌洗、CT和磁共振。但是这些检测方法主要是基于形态学标准，依然缺乏与乳腺癌相关的特异性标志。乳腺癌的治疗主要包括手术切除、化疗以及放疗或者几者综合治疗等方式。但是传统化疗、放疗的方式由于缺乏肿瘤细胞的靶向性导致非常严重的副作用。近年来发展的单克隆抗体虽然具有较高的特异性和亲和力，但是抗体本身所具有的一些缺陷，如免疫原性、不稳定性、批次间的差异性等使其在临床上的实际应用中具有一定的局限性。因此，找到乳腺肿瘤细胞的特异性靶标，在肿瘤的诊断和治疗中都具有重要意义。近些年发展的核酸适体探针，尤其是细胞靶向的核酸适体，能够特异性识别包括全血样品的复杂样品中的癌细胞，将给肿瘤的早期特异性快速诊断和靶向治疗带来新的希望和解决途径。

核酸适体（Tuerk,C.;Gold,L.,Systematic evolution of ligands by exponential enrichment:RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.Science 1990,249(4968),505-510;Ellington,A.D.;Szostak,J.W.,In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.Nature 1990,346(6287),818-822）是指从人工合成的单链DNA/RNA文库中筛选得到的能够高亲和性和高特异性地与靶标分子结合的单链寡核苷酸。核酸适体借助氢键、范德华力、疏水作用等分子间作用力形成特殊的三维结构，如发夹、假结、凸环、G-四聚体等，从而特异地识别靶物质并影响其生物活性。核酸适体本身特有的生化特性使其在生物医学应用领域具有诸多优势，如靶分子范围广、亲和力与特异性强、合成修饰方便快速、良好的生物兼容性、无毒、体外稳定性好等。核酸适体可以通过配体指数富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)（Sefah,K.;Shangguan,D.;Xiong,X.;O′Donoghue,M.B.;Tan,W.,Development of DNA aptamers using Cell-SELEX.Nat.Protocols 2010,5(6),1169-1185）筛选获得，其基本原理是在体外人工化学合成一个寡核苷酸文库，包括RNA、ssDNA或修饰的RNA和ssDNA，通过寡核苷酸文库与目标分子的相互作用，结合PCR技术指数级放大与靶分子特异结合的寡核苷酸，经过几轮或数十轮筛选过程，获得高亲和力和高特异性的核酸适体。

发明内容

本发明的第一目的在于提供具有高特异性和高亲和力的乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2。

本发明的第二目的在于提供乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2在与乳腺癌相关方面的应用。

所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体命名为LXL-2，其序列如下：

gaattcagtc ggacagcgca attgtggttc ttaccctatc ccttgtgttt ggcgttcgtt    60

gcgatggacg aatatcgtct ccc                                            83

所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2在0℃，0.157M/L Na⁺，0.005M/L Mg²⁺条件下具有独特的茎环结构，其茎环结构如下：

所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2的应用如下：

1）所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-2在制备乳腺癌诊断试剂中的应用。