[发明专利]检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器，包括工作电极、参比电极和对电极，其特征在于：所述工作电极是利用甲壳胺修饰石墨烯负载金纳米粒子并得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子纳米复合物，将纳米复合物用于修饰金电极，而后固定H7亚型禽流感病毒单克隆抗体而得。

2.根据权利要求1所述的检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器，其特征在于：所述参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂丝电极。

3.根据权利要求1所述检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于采用饱和甘汞电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，工作电极是利用甲壳胺修饰石墨烯负载金纳米粒子并得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子纳米复合物，将纳米复合物用于修饰金电极，而后固定H7亚型禽流感病毒单克隆抗体而得。

4.根据权利要求3所述检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于工作电极按以下步骤制备：

<1>石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子纳米复合物的制备

将0.5g的甲壳胺加入到100mL体积浓度1.0%醋酸溶液中，室温下条件下磁力搅拌1h，得到0.5wt%甲壳胺溶液；将1mg石墨烯加入到1mL 0.5wt%甲壳胺溶液超声2h，得到稳定的石墨烯-甲壳胺悬浊液；

取1mL质量浓度1.0%HAuCl₄溶液加入到制备好的石墨烯-甲壳胺悬浊液中，室温下搅拌30min，然后水浴加热至80℃继续反应1h，得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子纳米复合物；

<2>工作电极的制备

用移液枪移取8μL步骤<1>的石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子纳米复合物涂到直径为3毫米的金电极表面，4℃下自然晾干，然后滴涂15μL0.1mg/mL H7亚型禽流感病毒单克隆抗体置于4℃下反应8小时，再滴涂15μL1wt%BSA溶液37℃下封闭1h，取出用二次去离子水洗净，即可。

5.根据权利要求4所述检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于步骤<1>的石墨烯按以下步骤制备：冰水浴条件下，在200mL的烧杯中加入1g石墨粉、2.5g硝酸钾、100mL浓H₂SO₄，搅拌均匀后缓慢加入5g KMnO₄，随后将烧杯置于35℃水浴反应2h，逐步加入100mL去离子水，温度升至95℃继续反应1h，混合物由棕褐色变成亮黄色，冷却至室温后加入300mL水稀释，并加入质量分数为30%的H₂O₂中和未反应的高锰酸钾，先用0.5mol/L的盐酸洗涤，再用水反复离心洗涤，真空干燥，即得氧化石墨；称取10mg氧化石墨置于烧杯中，加入100mL去离子水，超声1h，得到氧化石墨烯；再以硼氢化钠作还原剂，95℃的条件下进行还原得到石墨烯。

6.根据权利要求4所述检测H7亚型禽流感病毒的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：步骤<2>的金电极先以0.05μm的Al₂O₃抛光粉抛光打磨至镜面后用蒸馏水洗干净，再分别在二次去离子水、无水乙醇、二次去离子水中超声清洗5min，用N₂吹干；然后在0.5mol·L^-1H₂SO₄溶液中用循环伏安进行扫描，扫描前通入N₂除氧15min，扫描速度为50mV/s，电压范围为-0.3～+1.5V，持续扫描直到循环伏安图稳定之后，取出用蒸馏水洗净，N₂吹干待用。