[发明专利]鸡IBV S1蛋白的CD8+T细胞抗原表位多肽

权利要求书

1.鸡IBV S1蛋白的CD8+T细胞抗原表位多肽，其特征在于，其氨基酸序列与鸡B-F2单倍型MHC I类分子的结合基序相符合。

2.如权利要求1所述的抗原表位多肽，其特征在于，

氨基酸序列符合鸡B-F2*12单倍型MHC I类分子结合基序，其氨基酸序列为GAYAVVNV；或，

氨基酸序列符合鸡B-F2*19单倍型MHC I类分子结合基序，其氨基酸序列分别为SRIQTATQP、SRIQTATDP或SRNATGSQP。

3.如权利要求1或2所述的抗原表位多肽在制备IBV通用疫苗或IBV诊断试剂盒中的应用。

4.编码权利要求2所述抗原表位多肽的基因。

5.一种用于制备IBV通用疫苗的CD8+T细胞抗原表位多肽组合，其特征在于，共四条多肽，其氨基酸序列分别为GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP、SRNATGSQP。

6.一种表达盒，其特征在于，含有四条多肽，其氨基酸序列分别为GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP、SRNATGSQP。

7.一种IBV通用疫苗，其特征在于，含有氨基酸序列为GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP和SRNATGSQP的多肽。

8.一种筛选鸡IBV S1蛋白的CD8+T细胞抗原表位的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）根据鸡B-F2单倍型MHC I类分子的结合基序，在鸡IBV S1蛋白的氨基酸序列中筛选与鸡B-F2单倍型结合基序相符合的表位多肽；

（2）构建多亚型的IBV S1蛋白真核表达质粒，并将该质粒免疫SPF鸡；

（3）分别取不同真核质粒免疫后SPF鸡的脾淋巴细胞，采用ELIspot法测定步骤（1）中筛选的多肽诱导鸡脾淋巴细胞分泌IFN-γ的能力，利用ELIspot读板机获取斑点数据，能显著诱导鸡脾淋巴细胞分泌IFN-γ的多肽即为鸡IBV S1蛋白功能性CD8+T细胞抗原表位。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述的多亚型IBVS1蛋白真核表达质粒分别为pVAX-S1-M41、pVAX-S1-T、pVAX-S1-QX。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（3）的ELIspot法是将鸡IFN-γ包被ELISPOT板，加入分离的脾淋巴细胞及步骤（1）的多肽培养24h后，顺次加入生物素标记的鸡IFN-γ检测抗体，链霉亲和素碱性磷酸酶，然后加入BCIP/NBT显色液，显色后进行读数。