[发明专利]一种短肽及其衍生物作为模板分子的应用及基于印迹技术制备血管紧张素合成受体的方法

权利要求书

1.一种短肽及其衍生物作为模板分子的应用，其特征是用于以印迹技术制备血管紧张素合成受体，所述模板分子包括血管紧张素Ⅱ的氮端或碳端的任何一段肽键及其衍生物、或血管紧张素Ⅰ的氮端或碳端的任何一段肽键及其衍生物中的一种。

2.基于印迹技术制备血管紧张素合成受体的方法，其特征包括如下步骤：

    （1）利用包括血管紧张素Ⅱ的氮端或碳端的任何一段肽键及其衍生物、或血管紧张素Ⅰ的氮端或碳端的任何一段肽键及其衍生物中的一种作为模板分子； 

（2）将模板分子，功能单体A，凝胶骨架单体溶解于蒸馏水中得溶液1；将功能单体B溶解于无水乙醇中得溶液2；将溶液2混合到上述溶液1中，振荡预作用，得溶液3；

（3）将交联剂单体及表面活性剂十二烷基硫酸钠加到步骤（2）的溶液3中，通氮气15～60min，加入引发剂，封口，氮气氛围反应，得到分子印迹纳米凝胶；

（4）印迹聚合物的纯化：将步骤（3）中得到的分子印迹纳米凝胶转入透析袋中，在蒸馏水中进行透析，透析后冷冻干燥，得到纳米凝胶受体即血管紧张素合成受体。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述模板分子包括以下（1）血管紧张素Ⅱ的C端三肽衍生物模板（Ac-His-Pro-Phe），（2）血管紧张素Ⅰ的C端三肽衍生物模板（Ac-Phe-His-Leu），（3）血管紧张素Ⅱ的N端三肽衍生物模板（Asp-Arg-Val-NHC₂H₅），（4）血管紧张素Ⅱ的N端一肽衍生物模板（Asp-NHC₂H₅），（5）血管紧张素Ⅱ的C端二肽衍生物模板（Ac-Pro-Phe），（6）血管紧张素Ⅱ的N端五肽衍生物模板（Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-NHC₂H₅）中的一种以上。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述功能单体A为丙烯酸，所述凝胶骨架单体为N-异丙基丙烯酰胺，所述功能单体B为N-叔丁基丙烯酰胺。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，模板分子、功能单体A、凝胶骨架单体与蒸馏水的摩尔比例为1:（7～9）:（11～18）: 2780；所述模板分子、功能单体A、功能单体B三种物质的摩尔比为：模板分子︰功能单体A︰功能单体B＝1︰（7～9）︰（1.6～9）；所述溶液3中三种单体总浓度为5.9～9.8mM,其中各单体浓度比为功能单体A︰功能单体B︰骨架单体=1:（0.17～1）︰（1.3～2.1）。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述所述的无水乙醇体积为溶液1中体积的2%～5%；所采用各种试剂的纯度均为分析纯及以上，蒸馏水为二次重蒸水；振荡预作用的时间为4-6小时。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）及（3）中，功能单体A、功能单体B、骨架单体及交联单体共四种单体在溶液3中总浓度为6～10mM,其中交联剂单体浓度为总浓度2%～4%，功能单体B浓度为总浓度5%～30%，功能单体A浓度为总浓度30%；所述氮气氛围反应的温度为23～25℃，反应时间为24～36小时。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述交联剂单体为N，N-甲叉双丙烯酰胺，其浓度为步骤（2）中三种单体总浓度的2%～4%；所述引发剂为过硫酸铵与N,N,N,N-四甲基二乙胺组合，两者加入后在溶液3中的浓度分别为0.6～1.0mg/mL,0.24～0.48mg/mL；所述表面活性剂十二烷基硫酸钠加入后在溶液3中的浓度为0.2～0.4mg/mL。

9.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（4）中所述透析袋规格为MWCO 10000，透析袋截留分子量为10000；所述透析时间至少四天，每天至少换两次水；所述冷冻干燥时间为2-3天。

10.由权利要求1~9所述方法或应用所得到的血管紧张素合成受体。