[发明专利]一种测定线虫对化学物质趋向性的方法及其装置

说明书

技术领域：

本发明涉及一种测定线虫对化学物质趋向性的方法及其装置，属植物线虫研究技术领域。

背景技术：

植物寄生线虫是一类重要的植物病原，危害各种植物，从低等的苔藓、蕨类、藻类、菌类到高等的裸子和被子植物都有线虫病害的记录，所有的栽培植物几乎都会受到一种以上线虫的寄生和危害，造成严重的损失，而且对于多数植物线虫病害目前缺乏有效的防治方法。

植物寄生线虫属于低等动物，虫体微小，结构简单，由于与寄生生活相适应，其感觉器官多数感觉器官已退化，仅靠对化学物质的感知来获取外部环境的信息，并据此进行运动。因此植物寄生线虫对植物的侵染与其他植物病原如真菌、细菌相比具有一定的主动性，即在自然环境中的植物寄生线虫必须感应到寄主植物所发出的化学信号刺激，才能进行有限的趋向性移动（通常不超过30cm），到达寄主适合的寄生部位进行寄生危害，而对于多数能产生严重危害线虫种类，一旦其侵入植物体内与寄主植物建立了寄生关系，由于受到植物的保护，多数线虫防治措施将难以奏效。当前的植物线虫防治方法主要是依靠在植物的周边环境中施用化学杀线虫剂，在线虫侵入进植物以前将其杀死，这种方法对线虫的防效显著，但弊端是药剂施用量大带来的环境污染和生态破坏，特别是近年来随着一些高效化学杀线虫剂因生态安全的原因被全面禁用，对研发安全高效线虫病害防治方法的呼声越来越高。在众多的化学杀线虫剂使用替代方案中利用线虫化学趋性物质（如引诱物质或驱避物质）对线虫的取食趋向性运动进行干扰被认为是一种较为有前景的方法。这一策略在昆虫的防治中已有了一些成功的应用，但对于线虫病害还没有应用的先例，其主要难点在于线虫趋性物质的测定和筛选，与昆虫不同线虫的虫体微小而且运动必须依赖水膜，成功应用于昆虫趋性物质研究的仪器和方法不适用于线虫。

本发明的一种用线虫化学趋向性的测定的方法及其装置，经文献检索，未见与本发明技术方案相同的公开报道。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术之不足，而提供一种测定线虫对化学物质趋向性的方法及其装置。

本发明的测定线虫对化学物质趋向性的方法，其具体步骤如下：

a、将检测样品放入装有填充介质的黑色圆形管（2）中，并插入透明无盖的圆柱体容器（1）壁上的孔中，同种检测样品间隔排布；填充介质为凝胶或无菌石英砂或土壤；

b、将同种填充介质装入透明无盖的圆柱体容器（1）中，至淹没透明无盖的圆柱体容器（1）壁上所开的圆孔为止，如填充介质为凝胶，置于常温环境下待凝胶凝固；

c、将计数的活体线虫置于透明无盖圆柱体容器（1）中填充介质表面的中心位置，移入恒温箱内，25℃保温24-48小时，期间采用喷雾方法保持填充介质湿润，之后将黑色圆形管（2）逐一取下，移除黑色圆形管（2）中的填充介质；

d. 按常规方法分离填充介质中的线虫；

e. 在体视镜下，观察计数分离到的线虫数量，即得出测定线虫对化学物质的趋向性。

用于测定线虫对化学物质趋向性的装置，由壁上开有孔的透明无盖圆柱体容器（1）和插在透明无盖圆柱体容器（1）壁上的的孔中黑色圆形管（2）组成；其中：透明无盖圆柱体容器（1）壁上的开孔数量和黑圆形管（2）的数量视实验的需求确定。

本发明的装置采用市售材料按常规方法制备。

本发明优点在于：（1）结构简单、方法方便、实验数据准确可靠；（2）实验时间短，工作效率高，劳动强度低；（3）应用范围广，适宜植物组织或粗分离及单体化合物的测定。

附图说明：

图1为本发明装置的结构示意图。

具体实施方式：

实施例所用装置由壁上开有孔的透明无盖的圆柱体容器1，及插在透明无盖圆柱体容器1壁上孔中的黑色圆形管2组成。采用市售产品或材料按常规方法制备。

实施例1 测定小麦、番茄和万寿菊根系物质对爪哇根结线虫二龄幼虫的吸引作用

a.选用直径9cm、高1.5cm的无盖圆柱体透明塑料容器1，无盖圆柱体透明塑料容器1的壁上，每隔4.71cm开1个直径为1cm的圆孔，共开6个孔。准备6根长度为9cm、直径为1cm的黑色圆形管2。

b. 分别将2g万寿菊、感病番茄和小麦根尖装入填充有pluronic F-127凝胶的黑色圆形管2中，每种植物装2根管；

c. 将装好样品的黑色圆形管2分别插入透明无盖的圆柱体容器1壁上的所开的孔中，同种样品间隔排布；