[发明专利]一种发酵虫草菌粉多糖复合物的制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物复合物，特别涉及涉及一种从发酵虫草菌粉、虫草发酵液中提取得到的发酵虫草菌粉胞内多糖、胞外多糖及多糖复合物及其制备方法，以及该虫草多糖复合物用于改善免疫力，作为免疫力低下的疾病辅助治疗药物。 

背景技术

多糖作为冬虫夏草中一种重要的活性化合物，具有抗肿瘤、调节免疫、抗病毒、抗辐射及延缓衰老等药理作用。从天然冬虫夏草及人工虫草子实体或菌丝体中得到的多糖称为胞内多糖，而从虫草发酵液中得到的为胞外多糖。受自然环境所限制，目前冬虫夏草多糖主要通过人工发酵培养获取。工业生产人工虫草的培养液一般均弃之不用，对之研究报道甚少，但培养液中仍存在着大量有效成分，我们从培养液中分离提取得到多糖组分(胞外多糖)，将其和胞内多糖采用粒子分散混合技术制备成多糖复合物，可以充分利用资源，并发挥对免疫功能的调节作用。 

本研究所用的胞内多糖、胞外多糖从发酵虫草菌粉及发酵液分离纯化所得，其中在生产中发酵液作为废弃液处理，本研究液可以将虫草发酵液充分利用，达到节省原料、资源充分利用的作用。 

研究考察了人工虫草胞内与胞外多糖对非特异性和特异性免疫 功能的影响。结果表明人工虫草胞内及胞外多糖均有增强单核巨噬细胞吞噬功能的作用，将胞内多糖和胞外多糖制成多糖复合物后，其药理作用增强。 

发明内容

本发明提供一种虫草多糖的复合物，其由胞内多糖和胞外多糖混合而成，两者重量比例为1:20～20:1，优选1:10～10:1，更优选1:5～5:1，特别优选1:2～2:1，最优选1:1。 

其中所述胞内多糖以发酵虫草菌粉为原料，经过提取制备而成， 

其中所述胞外多糖以虫草菌丝体发酵过程中的留下的发酵培养液作为原料，经过提取制备而成， 

本发明所述胞内多糖和胞外多糖的提取可以采用现有技术中的任何方法进行，可以采用相同方法，也可以采用不同方法，优选如下方法：原料用乙醇脱脂、脱脂后的原料经过水提醇沉、得到的沉淀物再用sevage试剂沉淀除蛋白、得到上清液，上清液浓缩经乙醇沉淀，得到沉淀物，经洗涤干燥得到多糖。 

本发明最优选的多糖制备方法见实施例。 

经以上方法可分别制备胞外多糖、胞内多糖。 

本发明进一步将胞外多糖、胞内多糖比例混合制备成本发明的虫草多糖复合物。所述混合可以采用以下方法： 

将胞外多糖、胞内多糖分别粉碎，按1:20～20:1的比例混合均匀；将微粉硅胶粉碎至一定粒径后（粒径在1μm～50μm范围），采用粒子分散混合技术按一定比例和多糖混合均匀，即得。 

优选的混合方法如下： 

将胞内多糖与胞外多糖分别粉碎，按比例混合均匀得到混合多糖；将微粉硅胶超微粉碎5-20分钟，按混合多糖重量5-20%的比例加入到混合多糖中，研磨混合5-30分钟，制成本发明的多糖复合物。 

本发明的虫草多糖复合物，可以直接服用，也可以制备成适合服用的制剂形式，如经口服或不经口服的制剂形式。经口服给药时，可直接或首先使该类化合物与常规的药用辅剂混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式；非经口给药时，可以注射液、输液剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。 

药理实验表明本发明的虫草多糖复合物有调节免疫力及增加免疫力的活性。有关实验如下： 

发酵虫草菌粉多糖复合物药理作用研究： 

药物采用本发明实施例1和2的方法制备的多糖复合物以及单独的胞内多糖和胞外多糖，以作对照比较。 

实验1.胞内多糖、胞外多糖及多糖复合物对小鼠的碳粒廓清指数和吞噬指数的影响 

取18～22g SPF级Balb/c小鼠，雌雄各半，随机分组。给药剂量如表1所示，每天1次，连续15天。给药第8天，除空白组外，其余各组腹腔注射CTX40mg/Kg，连续3d。于末次给药1小时，称重，各鼠尾静脉注入4倍稀释的印度墨汁，每10g体重0.1mL（0.01ml/g），于注入墨汁后第1、5min，分别从眼内眦静脉丛取血20μL，立即将血液加入到盛有2mL的Na₂CO₃（1g/L）溶液的试管中（试管及吸管 均用肝素钠试液冲洗）；取血完毕后，再取20μL正常小鼠的血液加入到2mL的Na₂CO₃溶液中作为空白对照；用紫外可见分光光度计于650nm波长处测光密度值(OD)，以此测定小鼠血液碳粒廓清速率。结果见表1