[发明专利]基于磁性分子印迹聚合物放大效应的SPR传感器构建及应用

权利要求书

1.基于磁性分子印迹聚合物放大效应的SPR传感器构建，其特征在于所述构建包括以下步骤：

（1）Fe₃O₄ NPs的制备：将2.35 g FeSO₄7H₂O和4.1 g FeCl₃6H₂O溶解于90 mL水中，室温下迅速加入25 mL质量百分浓度为25%的氨水，溶液由橙色变成黑色，再逐滴加入1 mL油酸，于80 oC下反应1 h，获得平均粒径为6-7 nm的Fe₃O₄ NPs，上述实验过程需在氮气保护下进行；最后，用磁铁将溶液中的Fe₃O₄ NPs分离出来，于4 °C储存备用；

（2）磁性分子印迹聚合物的制备：将50 mg Fe₃O₄ NPs溶解于20 mL、10 mM、pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液中，加入5mL含1 mg/mL毒死蜱的乙腈溶液，室温下机械搅拌2 h，再加入25 mg多巴胺，室温下继续搅拌4 h；反应产物用磁铁分离出来，用体积比3%醋酸和体积比20%乙腈的混合溶液洗脱印迹的毒死蜱分子和未聚合的多巴胺，直至洗脱液中检测不到毒死蜱的紫外吸收峰；最后，用二次水将醋酸和乙腈清洗干净，即获得含有毒死蜱印迹空腔的磁性分子印迹聚合物；非分子印迹聚合物的制备过程与磁性分子印迹聚合物相似，只是不加入目标分子毒死蜱；

（3）SPR传感界面的构建：将金片在体积比7:3的H₂SO₄:H₂O₂混合溶液中浸泡2 min，用二次水冲洗干净并用氮气吹干，安装入SPR检测池；向检测池中注入50 μL、1 mM的11-巯基十一烷酸溶液，反应2 h，用二次水冲洗后，注入50 μL 0.2 M 1-乙基-3-(3-二甲氨基碳二亚胺)盐酸盐和0.05 M N-羟基丁二酰亚胺混合溶液反应10 min，再注入50 μL、2 U/mL的乙酰胆碱酯酶溶液反应30 min；最后，注入50 μL、1.0 M的乙醇胺溶液反应10 min，用10 mM、pH 8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液冲洗后，制得乙酰胆碱酯酶功能化的SPR传感界面。

2.根据权利要求1所述的基于磁性分子印迹聚合物放大效应的SPR传感器构建，其特征在于步骤（3）中，所述的11-巯基十一烷酸溶液用无水乙醇配制。

3.根据权利要求1所述的基于磁性分子印迹聚合物放大效应的SPR传感器构建，其特征在于步骤（3）中，所述的乙醇胺溶液用浓度为10 mM、pH为8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液配制。

4.根据权利要求1所述的基于磁性分子印迹聚合物放大效应的SPR传感器构建，其特征在于步骤（3）中，所述的乙酰胆碱酯酶溶液用浓度为10 mM、pH为8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液配制。

5.基于磁性分子印迹聚合物放大效应构建的SPR传感器在农药检测中的应用：其特征在于，将毒死蜱与含有印迹空腔的磁性分子印迹聚合物在室温下混合并在摇床上震荡孵育12 h，获得重结合了毒死蜱的磁性分子印迹聚合物；将其注入SPR检测池中与传感界面的乙酰胆碱酯酶反应30 min，然后用蠕动泵将反应溶液排出并注入50 μL、10 mM、pH 8.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲溶液进行清洗解离；随着样品中毒死蜱浓度的增大，结合到传感界面的磁性分子印迹聚合物逐渐增多，SPR响应信号逐渐增强，SPR角度变化与毒死蜱浓度在0.001-10 μM范围内呈良好的线性关系；本发明构建的传感器对浓度为10 μM毒死蜱检测的灵敏度比直接检测法提高了64倍，而且，传感器只对毒死蜱有良好的响应，而对与毒死蜱结构类似的乐果、扑灭津和杀螟硫磷等农药几乎没有响应，表明本发明构建的传感器对毒死蜱的检测具有高灵敏性和良好的选择性。