[发明专利]一种基于绞股蓝的复合饲料添加剂制备工艺

权利要求书

1.一种基于绞股蓝的复合饲料添加剂制备工艺，其特征在于：其工艺步骤如下：

A.预处理：将绞股蓝粉碎至80-100目的细度;

B.枯草芽孢杆菌ACCC 10634 bacillus subtilis的制备方法，其步骤是：

a.培养基配制：以枯草芽孢杆菌为菌种，由下述原料制作培养基：

斜面种子培养基为：蛋白胨4.5-5.5 g/L，牛肉膏2.5-3.5 g/L， NaCl4.5-5.0 g/L，琼脂15.0-18.0 g/L，MnSO₄·2H₂O0.005 g/L；

种子罐种子培养基：绞股蓝细粉40.0 g/L，玉米浆0.5-1.0 g/L，K₂HPO₄1.0-1.5 g/L， KH₂PO₄0.5-1.0 g/L，MnSO₄·2H₂O0.005 g/L，NaCl4.5-5.0 g/L，H₂O余量；

发酵罐培养基：绞股蓝细粉40.0 g/L，玉米浆1.5-2.0 g/L，K₂HPO₄1.5-2.0 g/L，KH₂PO₄0.5-1.0 g/L，MnSO₄·2H₂O0.005 g/L，NaCl4.5-5.0 g/L，H₂O余量；

PH值7.0-7.2，115℃灭菌30-40min;

b. 斜面种子培养：将枯草芽孢杆菌（ACCC 10634 bacillus subtilis）无菌操作，接种到茄子瓶斜面，28-30℃培养38-42h，无菌操作，无菌水洗涤，转入接种瓶;

c. 种子培养：将接种瓶的种子接入种子罐，28-30℃、通气量1:1，自动流加消泡剂，培养18-24h；镜检，菌体生长健壮均匀，移种至发酵罐;

d. 发酵培养：28-30℃、通气量1:1，自动流加消泡剂，培养38-44h；镜检，菌体变短，至菌数10⁸个/ml，停止发酵；消泡剂：泡敌与水重量比为10%;

C.植物乳杆菌ACCC11016  Lactobacillus  plantarun的制备，其步骤是：

a.培养基配制：由下述原料制作培养基：

斜面种子培养基：酪蛋白胨9.5-10.5 g/L，牛肉提取物9.5-10.5 g/L，酵母膏4.5-5.5 g/L,葡萄糖4.5-5.5 g/L,乙酸钠4.5-5.0 g/L,琼脂15.0-18.0 g/L,柠檬酸二铵1.0-2.0 g/L,MgSO₄·7H₂O0.02 g/L，MnSO₄·2H₂O0.05 g/L, CaCO₃19.0-21.0 g/L, K₂HPO₄1.5-2.0 g/L, H₂O余量;

种子罐、发酵罐培养基：绞股蓝细粉40.0 g/L，玉米浆粉0.5-1.0 g/L，乙酸钠4.5-5.0 g/L, 檬酸二铵1.0-2.0 g/L，MgSO₄·7H₂O0.02 g/L,MnSO₄·2H₂O0.05 g/L，CaCO₃19.0-21.0 g/L, K₂HPO₄1.5-2.0 g/L, H₂O余量；

PH值6.7-6.9，115℃灭菌30-40min;

b.斜面种子培养：将植物乳杆菌无菌操作，接种到茄子瓶斜面，28-30℃培养20-24h，无菌操作，无菌水洗涤，转入接种瓶；

c.种子培养：将接种瓶的种子接入种子罐，28-30℃、每2小时搅拌15min，培养20-24h；镜检，菌体生长健壮均匀，移种至发酵罐；

d.发酵培养：28-30℃、每2小时搅拌15min，培养20-24h；镜检，菌体变细长，至菌数10⁸个/ml，停止发酵；

D.配制：取枯草芽孢杆菌菌液与植物乳杆菌菌液按体积比2:1-2比例配制，搅拌均匀。