[发明专利]犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试纸及制备方法，具体涉及一种犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸及制备方法。

背景技术

狂犬病是由狂犬病毒（Rabies virus，RV）引起的人畜共患传染病，其主要宿主为犬、猫等动物。典型症状为恐水症，又称：恐水病。本病极为凶险，病死率几乎为100%。我国是狂犬病的高发国家，居世界第二位，仅次于印度。我国平均每年有1500多病例，约半数发生在广西、湖南、贵州三省，在这三省犬携带RV率高达2.3%。外观健康犬脑内带毒率约5.88～13.13%，对人类的健康造成很大威胁。随着经济的发展和人民生活水平的提高，宠物犬的数量在不但增加，犬的活动区域也在不断扩大。从宠物医疗市场得到的信息，人们迫切希望了解宠物犬接种狂犬疫苗后犬是否获得抗体的保护，而目前狂犬病毒抗体的检测工作因受检测条件和费用的限制，并没有得到广泛的应用。

目前，国内外用于实验动物包括犬、猴、鼠等狂犬病毒抗体检测的方法和相应的试剂盒，有一定的研究和报道。但是现有检测狂犬病毒抗体的方法包括ELISA方法、荧光免疫法、放射免疫法及化学发光法等都存在相应的弱点。ELISA方法虽然灵敏度高，但判读结果需要一定的仪器设备。荧光免疫法、放射免疫法及化学发光法等均耗时长，且也需要一定的实验仪器，另外，放射免疫法还存在放射性同位素污染的问题。而胶体金免疫层析法刚好可以避免以上几种检测方法的缺点。该方法是一种很成熟的实验检测方法，以其特异性强、成本低，操作简便，结果可靠、可单份或成批测定、不需任何仪器等优点已被广泛接受。现有关于狂犬病毒抗体胶体金检测试纸的专利中一般都是1条对照线（或质控线），结果判读是根据检测线颜色深浅进行，不能进行抗体水平高低的判定。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸。该试纸采用胶体金标记的狂犬病毒单克隆抗体和胶体金标记的兔IgG做探针，包被羊抗犬IgG抗体、羊抗兔IgG抗体和羊抗鼠IgG抗体，结合样品吸收区的狂犬病毒抗原进行抗狂犬病毒IgG抗体的检测。

本发明的另一目的在于提供上述犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸的制备方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸，包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗体区、吸水区和支撑板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗体区和吸水区铺设在支撑板上并依次相互部分重叠；所述的样品吸收区包被有狂犬病毒抗原，包被量优选为5～50μg；所述的金标探针区包被有金标探针1和金标探针2；所述的金标探针1为胶体金标记的狂犬病毒单克隆抗体，其标记量优选为每mL胶体金标记5～20μg单抗；所述的金标探针2为胶体金标记的兔IgG，其标记量优选为每mL胶体金标记1～10μg兔IgG；所述的固相化抗体区（自金标探针区至吸水区方向）依次有对照线C1、测试线T、对照线C2和对照线C3；所述的对照线C1包被有羊抗兔IgG抗体，包被量优选为0.05～0.5μg；所述的检测线T包被有羊抗犬IgG抗体，包被量优选为0.5～5μg；所述的对照线C2包被有羊抗兔IgG抗体，包被量优选为0.5～5μg；所述的对照线C3包被有羊抗鼠IgG抗体，包被量优选为1～5μg。

所述的支撑板的材料优选为粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板；所述的样品吸收区的材料优选为玻璃纤维膜；所述的金标探针区的材料优选为聚酯膜；所述的固相化抗体区的材料优选为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料优选为吸水滤纸。

上述犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，包括如下步骤：将胶体金标记的狂犬病毒单克隆抗体和胶体金标记的兔IgG分别喷涂于聚酯膜上；在硝酸纤维素膜上依次包被对照线C1（包被羊抗兔IgG抗体）、测试线T（包被羊抗犬IgG抗体）、对照线C2（包被羊抗兔IgG抗体）和对照线C3（包被羊抗鼠IgG抗体）；在玻璃纤维膜上包被狂犬病毒抗原；将玻璃纤维膜、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装到支撑板上得到犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸。

优选的，所述的犬抗狂犬病毒IgG抗体胶体金免疫层析检测试纸的制备方法包括如下步骤：