[发明专利]人感染H7N9禽流感表位抗原及其在免疫检测试剂中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及人感染H7N9禽流感抗原，还涉及该抗原在制备检测人感染H7N9禽流感抗体检测中的用途。

背景技术

尽管2013年3月发现的人感染H7N9禽流感病毒多为散发病例，尚无人与人之间传播的确切证据，但已经波及10省市，上百人感染，数十人死亡，引起国家卫生和防疫部门的高度重视。

流感病毒根据核蛋白和基质蛋白的抗原特性和差异分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。甲型流感依据其外膜血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9)。其中H1N1、H2N2、H3N2亚型为我国人群常见甲型流感流行亚型，而H5、H7、H9亚型主要感染禽，其中H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3可感染人，2013年暴发的人感染H7N9流感病毒为新型重配病毒，是国际上首次报道H7N9能感染人的病例。

H7N9病毒属于正粘病毒科甲型流感病毒属，为单股负链RNA病毒，含有8个大小不等的基因节段。序列同源分析发现此次新发的人感染H7N9禽流病毒中的6个基因节段与2012年北京花鸡中分离的A/brambling/Beijing/16/2012-like viruses(H9N2)病毒高度同源；其余两个基因节段中，HA基因与浙江鸭子身上分离的A/duck/Zhejiang/12/2011(H7N3)亚型中H7抗原高度同源，NA基因与韩国野鸟中分离的A/wild bird/Korea/A14/2011(H7N9)N9抗原高度同源，但两者的H7抗原并不相同，提示此次新发的H7N9禽流感病毒是以H9N2为内部基因的新型重配病毒(Gao R，Cao B，HuY，et al.Human infection with a novel avian-origin influenza A(H7N9)virus.N Engl J Med.2013May16；368(20)：1888-97)。

HA和NA抗原是流感病毒表面的重要糖蛋白，具有很高的变异性，是流感病毒区分亚型的依据。其中HA抗原具有很强的免疫原性，并能刺激机体产生保护性抗体，是疫苗研究中的重要组份；NA抗原能水解唾液酸，是抗病毒药物研究的重要靶标。HA抗原在体内水解后形成HA1、HA2两个亚基，其中HA2相对保守，主要负责病毒与细胞之间的膜融合，实验动物显示抗HA2抗体没有很强的保护性抗体产生。不同亚型之间HA1抗原的变异较大，其抗体具有明显保护作用，如果去掉的抗HA1抗体，血清中的其他抗体不能有效抑制发生红细胞凝集和中和病毒的作用，这些研究提示HA1亚基在H7N9亚型的血清学鉴定中可能具有重要地位。NA抗原为蘑菇状的四聚体抗原，其抗C段具有和好的免疫原性，NA抗体能辅助HA抗体进行中和作用及血凝抑制功能。已有研究显示，重组HA1抗原可用于家禽流感病毒的检测和疫苗效果的评价，但重组HA1抗原用于人感染流感病毒的检测未见报道。

流感通过快速的变异逃逸机体原有的免疫反应，针对新的流感病毒株，宿主首先分泌IgM抗体，在对2009年新发的甲型H1N1流感的回顾性研究显示：发病当天就有84.7％的患者产生了抗流感病毒的IgM抗体，与2008年前流感人群血清的交叉性仅为6％；相比之下，IgG抗体在两组人群中并没有显著区别，这一发现提示对IgM抗体的检测能有效区分新发流感，具有很好地早期诊断价值。发病后4-10天，IgG抗体开始出现，患者血清表现出抑制红细胞凝集(HI)的现象，当清除掉血清中的IgM抗体，HI基本上不受影响；但清除掉IgG，HI作用显著降低，提示IgG是HI测试中主要抗体类型，在疫苗保护效果评价、临床转归中具有重要意义(Qiu C，Tian D，WanY，et al.Early adaptive humoral immune responses and virus clearance in humans recently infected with pandemic2009H1N1influenza virus.PLoS One.2011；6(8)：e22603.)。