[发明专利]水稻抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记及其应用

权利要求书

1.一种水稻抗褐飞虱主效基因Bph14的基因标记Bph14-M1，其正反引物序列如下：

正向引物(5′-3′)AGCCACTTGGTGAACTTATT，

反向引物(5′-3′)GATTGACGATGAGGAGACTT。

2.权利要求1所述基因标记Bph14-M1的应用方法，包括以下步骤：

1)提取水稻基因组DNA；

2)使用所述正反引物序列，PCR扩增水稻基因组DNA；

3)电泳检测扩增产物，如果出现307bp的单条带，则表示水稻品种含纯合的抗褐飞虱基因Bph14；如果出现432bp的单条带，则表示水稻品种含纯合的褐飞虱敏感等位基因bph14；如果有307bp和432bp两条带，则表示水稻品种为Bph14/bph14杂合体。

3.如权利要求2所述的应用，其中，步骤2)中具体操作为：PCR采用10μL反应体系：模板DNA1.0μL，10×PCR Buffer1.0μL，25mM的MgCl₂1.0μL，2mM的dNTP1.0μL，0.3μM的引物1.0μL，Taq酶0.2U，加ddH₂O补至10μL；PCR扩增条件为：(1)94℃预变性5min；(2)94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，扩增32个循环；(3)72℃延伸5min，16℃保温。