[发明专利]二氢查耳酮的生物技术生产方法

说明书

给出了关于以下的描述：使用转基因微生物生产二氢查耳酮尤其是根皮素的方法，所述转基因微生物包含核酸区段(a)和/或核酸区段(a’)以及核酸区段(b)，所述核酸区段(a)包含编码细菌查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(a’)包含编码植物查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(b)包含编码细菌烯醇还原酶(enoate reductase)的基因或由其组成；相应的转基因微生物，其包含核酸区段(a)和/或核酸区段(a’)和/或核酸区段(b)，所述核酸区段(a)包含编码细菌查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(a’)包含编码植物查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(b)包含编码细菌烯醇还原酶的基因或由其组成；以及宿主细胞，其包含一种或更多种相同或不同的这样的载体。

本发明主要涉及使用转基因微生物生产二氢查耳酮尤其是根皮素(phloretin)的方法，或者还原黄烷酮(flavanones)的方法，所述转基因微生物包含核酸区段(a)和/或核酸区段(a’)以及核酸区段(b)，所述核酸区段(a)包含编码细菌查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(a’)包含编码植物查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(b)包含编码细菌烯醇还原酶(enoate reductase)的基因或由其组成。

本发明还涉及这样的转基因微生物，其包含核酸区段(a)和/或核酸区段(a’)以及核酸区段(b)，所述核酸区段(a)包含编码细菌查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(a’)包含编码植物查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(b)包含编码细菌烯醇还原酶的基因或由其组成。

本发明还涉及这样的载体，尤其是质粒载体，其包含核酸区段(a)和/或核酸区段(a’)和/或核酸区段(b)，所述核酸区段(a)包含编码细菌查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(a’)包含编码植物查耳酮异构酶的基因或由其组成，所述核酸区段(b)包含编码细菌烯醇还原酶的基因或由其组成。

此外，本发明涉及这样的宿主细胞，其包含一种或更多种相同或不同的根据本发明的载体。

根据下面的描述、实施例，尤其是所附权利要求，本发明的其他方面是显而易见的。

二氢查耳酮(尤其是根皮素)通常通过查耳酮的化学还原或通过用二氢肉桂酸使酚发生傅-克酰基化(Friedel-Crafts acylation)来生产。该方法的缺点在于以该方式生产的食品添加剂、调味剂或芳香物质不能被描述为天然的。此外，可通过提取例如相应的糖苷(例如从苹果属(Malus spp.)原材料)随后生成糖苷配基(aglycone)来得到二氢查耳酮，尤其是根皮素。然而，该工艺耗时且成本高，并且还依赖于季节。

具有二氢查耳酮结构的重要调味剂和芳香物质是例如根皮素(例如，根据EP1,998,636-B1)、根皮苷(phloridzin)、三叶苷(trilobatin)(参见Tanaka，T.；Yamasaki，K.；Kohda，H.；Tanaka，O.；Mahato，S.B.，Dihydrochalcone-glucosides as sweet principlesof Symplocos ssp.Planta Medica1980，(Suppl.)，81-83)、柚皮苷二氢查耳酮(naringindihydrochalcone)和新橙皮苷二氢查耳酮(neohesperidine dihydrochalcone)(Crosby，G.A.，New Sweeteners.Critical Reviews in Food Science and Nutrition1976，(June)，297-323)。

由于现在需要并且未来也需要有利的二氢查耳酮，尤其是根皮素，所以本发明的主要问题是提供可以以工业规模用于生产二氢查耳酮尤其是根皮素的有效且优选节约成本的方法。

另一个问题是提供用于实施这种方法的合适的或必需的手段。

根据下面的描述，尤其是所附权利要求，本发明的其他问题是显而易见的。