[发明专利]一种高活性黄芪多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物领域，特别涉及一种从天然植物黄芪中分离制备高活性黄芪多糖的方法。

背景技术

黄芪(Radix Astragalus)是豆科植物，蒙古黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch)Bge Varmongholicus(Bge)Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch)Bge)的干燥根，性甘，微温，归脾、肺经，中医古籍大多把它归为补益药中的补气药，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托疮生肌之功效。

现代研究表明黄芪中含有多种有效成分，包括：多糖、皂甙、黄酮、氨基酸及多种微量元素等，其中黄芪多糖(Astragalus polysaccharides，APS)是含量最多的一种。其主要生物活性表现为增强免疫功能、脾脏增大、抗流感、抗肿瘤、防衰老及抗辐射，对急梗犬心有改善心肌收缩性能、缩小梗塞面积、减轻心肌损伤等作用。由于黄芪多糖的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。

黄芪多糖是由各种各样的杂多糖、均多糖组合成的混合物。据相关资料报道，黄芪多糖的分子量最小的不到1500，最大的达130多万（杨金兰，武正簧.应用150-C ALC/GPC色谱仪测试黄芪多糖的分子量及其分布.太原工业大学学报[J]，1994,25(4):77-84），分子量分布非常广。其中小分子量的多糖几乎没有药用效果（闫巧娟等.黄芪多糖的分子量分布.食品科学，2004,25(8)：27-29。吴瑕等.不同分子量段黄芪多糖对整体及粘膜免疫功能的影响.中国实验方剂学，2011,17(18):169-172。）。黄芪多糖的提取方法对其活性影响较大。虽然涉及黄芪多糖的提取分离方法的报道很多，但是方法对设备及环境要求很高，方法较复杂，成本高，不利于推广、开发和应用。现报道较多是通过超滤、微滤法截取黄芪多糖中某一段分子量范围的多糖，该法虽然简易，但是超滤、微滤法只是粗分离技术，其分离度不够精确，导致质量的不稳定性，严重的影响了黄芪多糖的药用效果。黄芪多糖的溶解度与分子量密切相关，同条件下一定分子量的多糖在水的溶解度是一定的，采用乙醇醇沉的方法，调醇浓至5～15%，将不溶于低浓度醇的纤维素及鞣质除去，再调醇浓至70～80%（绝大多数低分子量多糖还溶于该浓度下的乙醇溶液中）收集沉淀，干燥后得到质量稳定、高效的黄芪多糖。

发明内容

本发明提供一种高活性黄芪多糖的制备方法，由下述步骤组成：

（1）以黄芪药材为原料，按质量比，加入8～10倍量的水浸泡30～60min后回流提取2～3h，收集滤液和药渣，药渣中加入6～8倍量的水回流提取1～2h，收集滤液；

（2）待滤液冷却至室温后合并滤液，加入6～9%酶活为1500u/mg的中性胰蛋白酶，37℃水解2h后，煮沸10～20min灭活，离心，弃去沉淀，收集上层清液，浓缩至药材质量的2倍体积；

（3）往浓缩液中加入乙醇，调乙醇浓度至5～15%，4℃静置2h，抽滤，收集续滤液；

（4）往续滤液中加入乙醇，调乙醇浓度至70～80%，4℃静置2h，抽滤，收集沉淀物，真空干燥，得黄芪多糖。

所述步骤（3）中往浓缩液中加入乙醇，调乙醇浓度优选至10%。

所述步骤（4）中往续滤液中加入乙醇，调乙醇浓度优选至75%。

所述制备方法得到的黄芪多糖1～5%的水溶液应澄清；不含蛋白质及鞣质；分子量小于1400的糖占总糖的量为0～5%。

本发明的有益效果是：

利用本发明公开的制备方法，将传统方法制备的黄芪多糖中水溶性差的纤维素、鞣质及无药理作用的小分子量糖去除，利用中性胰蛋白酶将黄芪多糖中的蛋白质水解，得到溶水性好、无蛋白质及鞣质残留、安全可靠的高活性黄芪多糖。且本发明的方法对设备及环境要求低、步骤简单、选择性高、人力消耗及能耗低，成本低廉，利于推广、开发和应用。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

其中，下列实施例中选取的黄芪药材为山西产，所得黄芪多糖纯度采用苯酚-硫酸法测得。

实施例1：黄芪多糖的提取分离试验