[发明专利]一种酶法结合膜技术一步制备精品肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对猪小肠粘膜进行精深加工的方法，主要涉及一种以猪小肠粘膜为原料，利用生物技术制备精品肝素钠的方法。本发明采用生物酶法与膜分离技术相结合，一步制备高质量的精品肝素钠，避开传统工艺先制备粗品，再以粗品为原料制备精品的繁琐工艺。

背景技术

我国猪小肠资源丰富，肠粘膜又是生产肠衣的废弃物，而肝素含量甚高，所以我国主要从猪小肠粘膜中提取肝素钠。

肝素广泛存在于哺乳动物的各种器官组织中，是一类由结缔组织的肥大细胞产生的粘多糖物质。在自然界中广泛分布在猪、牛、狗等哺乳动物的内脏和肠粘膜中。肝素主要是由D-葡糖胺，L-艾杜糖醛酸，N-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，分子量分布在6000～20000。为白色或类白色粉末，无毒无味，有吸湿性。肝素通常以钠盐的形式存在，称为肝素钠（Heparin Sodium）或肝素钙，在使用中尤以肝素钠为主。肝素及其钠盐易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂，分子结构单元中含有5个硫酸基和2个羟基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子发生反应生成盐。游离酸在乙醚中有一定的溶解度。肝素钠是肝素以钠盐的形式被提取出来，并制成药用制剂。实际上产生药效的是肝素，肝素具有抗凝血作用，是一种应用已久的抗凝血剂。把肝素制成合适的钠盐能便于他的保存，制剂和使用，使其不至于在一定时期内失去活性和药效。

研究肝素钠提取工艺基于以下几点：第一，肝素首先从新鲜的健康生猪的小肠粘膜中提取并制成肝素粗品，肝素粗品中含有病毒及蛋白质，不能直接应用于临床治疗，需进一步提纯以制成肝素原料药，而在我国肝素钠行业，精品制作只掌握在少数一两家企业手中，大部分是以家庭式的作坊为主制作粗品肝素钠，这种方法制得的肝素钠效价低，并且生产过程产生的废水气味难闻，污染大。第二，肝素钠作为一种抗凝血的药物，由于其利润十分的可观，近年来同行业的竞争越来越大。生产精品肝素的专利年限即将到期，而同时仿制药已经在美国上市，出口价必将下降；第三，肝素钠行业产品利润分配极其不均匀，肝素钠的精品和粗品价格相差甚远，精品大多由国外生产，国内精品的生产技术只掌握在如海普瑞等少数厂家手中。而肝素钠的粗品市场很混乱，主要以作坊式的生产方式为主，品质和来源的稳定性不好控制。

发明内容

为了克服现有工艺的问题和缺陷，充分利用动物内脏资源，本发明提供一种从猪小肠粘膜中提取肝素钠的方法。以猪小肠粘膜为原料，采用生物提取技术及膜分离技术生产肝素钠。

本发明的目的可以通过下述技术方案来实现：

1、一种酶法结合膜技术一步制备精品肝素钠的方法，其特征在于按以下步骤进行：

a、将新鲜的猪小肠粘膜按其比重加入0.5倍的水，调节pH为7.0~7.5，置于98℃的水浴锅中，待料液温度上升到95℃时保温30min；

b、将a步骤得到的料液快速降温至50℃左右，调节pH为10.0左右，置于50℃的水浴锅中碱提搅拌2h；

c、将b步骤中得到的碱提液加入水解蛋白复合酶，在温度为55℃的水浴锅中搅拌酶解2h；

d、将c步骤中的酶解液冷却至室温，调节pH为6.5，静置3h以上，离心，得到沉淀和清液；

e、将d步骤中清液升温至30℃，经过压力为0.2～0.25MPa，温度为40～50℃，流量为90L/min条件下的微滤膜进行除杂，得到微滤膜滤液；

f、将e步骤中的透过液经过压力为1.5～2MPa，温度为40～50℃，流量为20L/min的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤膜浓缩液，浓缩液即为除去大部分杂质的肝素钠溶液；

g、将f步骤中得到的浓缩液调节pH为10.0左右，加入20%的乙醇搅拌，静置6h以上，然后过滤，收集滤液。

h、将g步骤中的滤液调节pH为6.5，补加浓缩液130%的乙醇，搅拌，静置2h，虹吸出上层清液，沉淀烘干即得产品肝素钠。

所述步骤a的操作是将肠粘膜中的蛋白质变性，有利于下一步的酶解，同时使肠粘膜中的肝素酶失活，避免下一步提取过程中肝素过早的分解。

所述步骤b中的调节pH值至10.0是为了将肝素与蛋白拆分。

所述步骤c中的酶解是为了使蛋白水解成多肽。

所述步骤e中的微滤膜除杂，为了截留杂质、纤维和大分子蛋白等。

所述步骤f中的纳滤膜浓缩，其浓缩倍数为10倍左右，也为后续干燥减轻负担。

本发明与已有工艺相比，具有以下优点：