[发明专利]一种用于检测毛发中皮质醇含量的前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物内分泌系统数据检测方法，尤其涉及一种皮质醇的检测方法。

背景技术

目前，头发中皮质醇（Cor.）的检测，LC-MS法、酶联免疫吸附法及放射免疫法都被研究中用到。由于考虑到检测灵敏度和特异性，以及检测成本的优越性，利用放射免疫法检测头发中的痕量皮质醇，成为目前测量头发中皮质醇的一个重要方法。

由于头发易受到外界环境污染等多方面因素，同时又不同于血清、尿液等检测介质，传统的采用手工剪碎、磨粉机磨碎、甲醇萃取等方法造成皮质醇提取量低，手工剪碎的过程还容易造成局部高温和发样粉碎不均的情况，严重影响检测结果稳定性和准确性。

发明内容

本发明的目的提供一种用于检测毛发中皮质醇含量的前处理方法，提高皮质醇检测的稳定性和准确度。

本发明提供了一种用于检测毛发中皮质醇含量的前处理方法，包括以下步骤，S1、取毛发样品，并将样品去角质化；S2、将S1去角质化后的样品进行液氮冷冻；S3、将经S2中液氮冷冻后的样品研磨粉碎；S4、萃取S3中粉碎后的样品，再干燥萃取后的混合溶液，将干燥所得溶质加入缓冲液。

本发明提出了一种用于检测毛发中皮质醇含量的前处理方法，在正常剪碎后需经液氮冷冻研磨的处理，避免了局部高温和发样粉碎不均的情况，得到更加准确、稳定的数据。

在一些实施方式中，S1中样品去角质化采用异丙醇浸泡。采用异丙醇浸泡的方法，不仅可以去除角质蛋白，有利于后续的萃取，还可以有清洗毛发的作用。

在一些实施方式中，S4中萃取使用体积比为5：3的甲醇与乙醚的混合溶液作为萃取溶剂。采用甲醇与乙醚的混合溶液进行萃取，操作简单，容易实施，本发明采用体积比为5：3的甲醇与乙醚的混合溶液，可进一步提高测量稳定性和准确性。

在一些实施方式中，S4中缓冲液选用磷酸缓冲液。

在一些实施方式中，S4中干燥选用氮吹仪。大大提高干燥速度。

在一些实施方式中，本发明还包括S4后的S5—冰箱冷藏储存至检测日。一般将采用-4℃的冷藏条件。

在一些实施方式中，本发明还包括S4后的S6—使用放射免疫试剂通过自动放免仪测定。本发明可作为放射免疫法测定毛发中皮质醇含量的前处理。检测灵敏度较高。

在一些实施方式中，S6中取溶质与缓冲液的混合液的上层清液进行测定。上清液的检出水平更加稳定合理。因为皮质醇作为激素存在人体，经过处理将皮质醇提出溶于溶剂中，离心作用后杂质沉淀，上清液中的激素水平相对稳定，检出的稳定性也随之升高。

附图说明

图1为本发明第一次试验制作的标准曲线图；

图2为本发明第二次试验制作的标准曲线图。

具体实施方式

本实验基于放射免疫法，设置不同实验条件的对照组进行试验，分析实验结果后择选出最优的实验条件，修正人体头发中皮质醇水平测定的样品前处理方法。

1.1试验采用仪器与试剂

表一：试验采用的仪器设备

表二：试验采用的试剂

1.2溶液配制

磷酸盐缓冲液（PBS溶液）:将1.5g混合磷酸盐倒入250ml容量瓶内，以少量无CO₂蒸馏水冲洗试剂袋内壁，冲洗水也加入上述250ml容量瓶中，并用无CO₂蒸馏水稀释到刻度摇匀，用3mol/L的NaOH调至pH至7.35。

取适量的标准品配制成浓度为分别为0、10、50、100、200、500ng/ml的标准溶液。

上述皮质醇放免试剂盒包括用来配制标准溶液的标准品，以及配制好的兔抗-Cor.抗体、驴抗兔免疫分离剂。

2.第一次试验

2.1第一次试验设计

试验分别采集男性、女性发样，试验为预试验，未设置空白对照和质控组，将男女发样分别作两个平行发样，此次试验采用正常剪碎发样的处理方式，在运用放射免疫法测定时，分为测定上清液、浑浊液。

根据上述，本次测定共有八个样品号，具体分组如下：

表三中样品组取上层清液测量；

表三：样品组一（上层清液测定组）