[发明专利]一种结核蛋白及其制备和应用无效
| 申请号： | 201310335183.8 | 申请日： | 2013-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN103360480A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 焦新安;殷月兰;高云飞;付红;徐正中;陈祥;潘志明;孙林 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C07K14/35 | 分类号： | C07K14/35;C12N15/31;C12N15/70;G01N33/569 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 结核 蛋白 及其 制备 应用 | ||
1.一种针对牛结核病具有免疫原性的重组蛋白，为含有分枝杆菌BCG_2653c的蛋白。
2.如权利要求1所述重组蛋白，其特征在于，BCG_2653c的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
3.根据权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于，通过下述方法得到：从BCG的基因组中扩增出BCG_2653c片段，将胶回收后得到的BCG_2653c片段与pMD-20T载体连接，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经PCR与双酶切验证正确的阳性克隆测序；将测序正确的阳性克隆进行提取质粒，进而双酶切，回收目的片段，再与表达载体pET-30a连接，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经PCR与双酶切验证正确，将阳性质粒转化至大肠杆菌DE3感受态细胞，通过IPTG诱导表达，得到包涵体蛋白，经蛋白变复性后，得到有活性的BCG_2653c蛋白。
4.权利要求1所述重组蛋白的制备方法，是：从BCG的基因组中扩增出BCG_2653c片段，将胶回收后得到的BCG_2653c片段与pMD-20T载体连接，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经PCR与双酶切验证正确的阳性克隆测序；将测序正确的阳性克隆进行提取质粒，进而双酶切，回收目的片段，再与表达载体pET-30a连接，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经PCR与双酶切验证正确，将阳性质粒转化至大肠杆菌DE3感受态细胞，通过IPTG诱导表达，得到包涵体蛋白，经蛋白变复性后，得到有活性的BCG_2653c蛋白。
5.权利要求1-3之一所述的重组蛋白在制备牛结核病检测试剂中的应用。
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