[发明专利]OX26/CTX-PL/pC27复合物及其在治疗神经胶质瘤中的应用

权利要求书

1.OX26/CTX偶联的PEG化的脂质体/pC27复合物，其特征在于是以转铁蛋白蛋白受体抗体OX26穿透血脑屏障和CTX作为胶质瘤靶向修饰的双配体修饰，以hTERTC27作为神经胶质瘤的治疗基因，以PEG化脂质体作为载体骨架得到的纳米基因载体。

2.权利要求1所述的OX26/CTX偶联的PEG化的脂质体/pC27复合物构建方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）称取25.1mg大豆卵磷脂S100、19.9mg DC-chol、10.5mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、8.8mg马来酰亚胺-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，用三氯甲烷溶解后，于室温下旋转蒸发使形成均匀的薄膜；

（2）用20ml三氯甲烷复溶，加入1ml含有质粒pEGFP0.5mg或pC270.5mg的pH7.4磷酸缓冲液，涡旋5min，于10℃下超声5min，再于30℃旋转蒸发至形成凝胶，继续旋转蒸发，至转相完全，形成透明的、有乳光的水相；

（3）依次过0.45μm、0.22μm的聚碳酸酯膜各4次，分别制得载有pEGFP和pC27的脂质体，分别标记为PL/pEGFP和PL/pC27；

（4）OX26和CTX分别用硼酸缓冲液溶解，再分别与2-亚氨基硫烷盐酸盐混合均匀，OX26/CTX与2-亚氨基硫烷盐酸盐的摩尔比为1:100，室温条件下反应1h；将反应体系转移至离心超滤管，采用14000rpm进行离心浓缩，再加pH8.0磷酸缓冲液离心，除去多余的2-亚氨基硫烷盐酸盐，将浓缩的巯基化的OX26-SH、CTX-SH与脂质体进行偶联反应；

（5）在弱碱性条件下，将巯基化合物OX26-SH、CTX-SH以及这两种巯基化物的物理混合物分别与脂质体PL/pEGFP和PL/pC27孵育过夜，肽与磷脂质量比为1:20，将脂质体与巯基化蛋白混合液采用琼脂糖凝胶填料sepharose CL-4B进行分离，除去未反应的巯基化蛋白，洗脱液为0.001M磷酸缓冲液，洗脱顺序为脂质体组分、游离的巯基化蛋白；先洗脱下来的带有乳光的体系，即为OX26/CTX偶联的PEG化的脂质体/pC27复合物。

3.权利要求1所述OX26/CTX偶联的PEG化的脂质体/pC27复合物在制备治疗神经胶质瘤的药物中的应用。