[发明专利]一种辅助鉴定冠菌素产生菌的引物组及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定冠菌素产生菌的引物组及其应用。

背景技术

冠菌素(coronatine,简称COR）是由植物病原菌的某些致病变种产生的一种非寄主专一性毒素，目前已知的冠菌素产生菌主要为丁香假单胞菌的一些致病变种，包括丁香假单胞菌大豆致病变种（Pseudomonas.syingae pv.glycinea）、丁香假单胞菌番茄致病变种（Pseudomonas.syingae pv.tomato）、丁香假单胞菌斑生致病变种（Pseudomonas.syingae pv.maculicola）、丁香假单胞菌桑致病变种（Pseudomonas.syingae pv.mori)等，此外，野油菜黄单胞菌新西兰麻致病变种（Xanthomonas campestris pv.phormiicola）、洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia Y57）和伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）也被报道具有冠菌素产生能力。

冠菌素作为茉莉酸甲酯的结构类似物，具有增强植物抗逆性、提高作物产量、提高次生代谢物含量、促进衰老等多种生理功能，但其生物活性更高，为茉莉酸甲酯的100-10000倍，可作为一种新型的植物生长调节物质。

冠菌素目前主要由冠菌素产生菌发酵产生，但目前已有的产冠菌素野生型菌株存在冠菌素产量低（如丁香假单胞菌桑致病变种最大产量仅为3.5mg/L）、发酵需在低温度下进行（如18℃）等问题，生产成本较高，对其研究及使用造成很大限制，分离筛选冠菌素产生菌野生型菌株有重大意义。

目前已有的分离筛选冠菌素产生菌的方法是通过对发病植物中分离出的所有细菌进行培养后，采用高效液相色谱测定其冠菌素产生情况来进行的，分离过程没有针对性，费时费力且有很大可能性得不到冠菌素产生菌，因此有必要建立一种冠菌素产生菌的高效、快速筛选技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定冠菌素产生菌的引物组及其应用。

本发明提供的引物组，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲为引物对甲-Ⅰ或引物对甲-Ⅱ；所述引物对甲-Ⅰ由序列表的序列1所示单链DNA片段和序列表的序列2所示单链DNA片段组成；所述引物对甲-Ⅱ由与序列表的序列1所示单链DNA片段反向互补的单链DNA片段和与序列表的序列2所示单链DNA片段反向互补的单链DNA片段组成；所述引物对乙为引物对乙-Ⅰ或引物对乙-Ⅱ；所述引物对乙-Ⅰ由序列表的序列3所示单链DNA片段和序列表的序列4所示单链DNA片段组成；所述引物对乙-Ⅱ由与序列表的序列3所示单链DNA片段反向互补的单链DNA片段和与序列表的序列4所示单链DNA片段反向互补的单链DNA片段组成。

本发明还保护所述引物组在辅助鉴定冠菌素产生菌中的应用。

本发明还保护应用所述引物组辅助鉴定冠菌素产生菌的方法，包括如下步骤：

以待测菌为模板，分别用所述引物对甲和所述引物对乙进行PCR扩增；

如果满足如下条件，所述待测菌为候选的冠菌素产生菌：采用所述引物对甲PCR扩增得到840bp-860bp（具体可为850bp）的扩增产物且采用所述引物对乙PCR扩增得到440bp-460bp（具体可为450bp）的扩增产物；

如果不满足所述条件，待测菌为候选的非冠菌素产生菌。

所述待测菌可为从发生细菌性叶斑病的植物叶片植物的病斑边缘分离纯化得到的纯培养的菌株。所述植物具体可为大豆。

本发明还保护所述引物组在辅助筛选冠菌素产生菌中的应用。

本发明还保护应用所述引物组辅助筛选冠菌素产生菌的方法，包括如下步骤：

以待测菌为模板，分别用所述引物对甲和所述引物对乙进行PCR扩增；

如果满足如下条件，所述待测菌为候选的冠菌素产生菌：采用所述引物对甲PCR扩增得到840bp-860bp（具体可为850bp）的扩增产物且采用所述引物对乙PCR扩增得到440bp-460bp（具体可为450bp）的扩增产物。

所述待测菌可为从发生细菌性叶斑病的植物叶片植物的病斑边缘分离纯化得到的纯培养的菌株。所述植物具体可为大豆。

本发明还保护所述引物组在制备辅助鉴定冠菌素产生菌的试剂盒中的应用。

本发明还保护一种辅助鉴定冠菌素产生菌的试剂盒，包括所述引物组。

本发明还保护所述引物组在制备辅助筛选冠菌素产生菌的试剂盒中的应用。

本发明还保护一种辅助筛选冠菌素产生菌的试剂盒，包括所述引物组。