[发明专利]一种检测肝纤维化程度的液相蛋白芯片试剂盒

权利要求书

1.一种检测肝纤维化程度的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，包括偶联抗体的微球，所述偶联抗体的微球包括早期微球、活动期微球和后期微球；其中，

所述早期微球为偶联了反映早期肝纤维化的标志物的捕获抗体的荧光微球，选自偶联了Ⅲ型前胶原肽捕获抗体的荧光微球、偶联了金属蛋白酶组织抑制因子-1捕获抗体的荧光微球中的一种或两种；

所述活动期微球为偶联了反映活动期肝纤维化的标志物的捕获抗体的荧光微球，选自偶联了Ⅳ型胶原肽捕获抗体的荧光微球、偶联了纤维连接蛋白捕获抗体的荧光微球、偶联了转化生长因子-β1捕获抗体的荧光微球、偶联了血小板衍化生长因子捕获抗体的荧光微球、偶联了肿瘤坏死因子α捕获抗体的荧光微球、偶联了血管紧张素II捕获抗体的荧光微球中的一种或多种；

所述后期微球为偶联了反映肝纤维化后期的标志物的捕获抗体的荧光微球，选自偶联了血清透明质酸捕获抗体的荧光微球、偶联了层粘蛋白捕获抗体的荧光微球中的一种或两种。

2.根据权利要求1所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述早期微球为偶联了金属蛋白酶组织抑制因子-1捕获抗体的荧光微球；所述活动期荧光微球由偶联了转化生长因子-β1捕获抗体的荧光微球、偶联了Ⅳ型胶原肽捕获抗体的荧光微球组成；所述后期荧光微球为偶联了层粘蛋白捕获抗体的荧光微球。

3.根据权利要求1或2所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为荧光色编码微球，每种荧光微球的荧光色均不相同。

4.根据权利要求1所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为羧基活化的乳胶颗粒。

5.根据权利要求1所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，还包括信号标记的检测抗体，每一种检测抗体分别抗一种肝纤维化的标志物且对应于微球上偶联的捕获抗体，并与捕获抗体分别结合于该标记物的不同抗原表位。

6.根据权利要求5所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，所述信号标记的检测抗体为生物素标记的检测抗体。

7.根据权利要求5或6所述的液相蛋白芯片试剂盒，其特征在于，还包括标准品和质控品，所述标准品为微球上偶联的捕获抗体对应的标志物的标准品或健康人血清标本；所述质控品包含阳性对照品和阴性对照品。

8.一种无创检测肝纤维化相关标志物的方法，其特征在于，采用权利要求1-7中任意一项所述的液相蛋白芯片试剂盒，包括以下步骤：

1）在实验板的相应孔中分别加入标准品、质控品和待测血清样品；

2）在实验板的相应孔中放入偶联抗体的微球的混合悬液；

3）孵育，使标志物与微球上偶联的捕获抗体发生免疫反应；

4）洗涤后，加入信号标记的检测抗体，孵育，使检测抗体与微球上捕获抗体捕获的标志物发生免疫反应；

5）洗涤后，检测分析得到检测结果；

其中，步骤1）和2）的顺序可交换。

9.一种权利要求1所述液相蛋白芯片试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，取荧光微球，对微球表面的羧基进行活化以利于偶联；

步骤2，向步骤1处理得到的活化微球加入相应的捕获抗体的缓冲液，孵育；

步骤3，封闭步骤2处理后得到的微球表面的未结合位点，即得捕获抗体的荧光微球。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，还包括前处理步骤：清洁荧光微球。