[发明专利]高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及烟草和化学技术领域，特别是涉及一种高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的方法。

背景技术

咖啡酸是广泛存在于天然植物中并具有显著生物活性的化合物，具有较广泛的抑菌作用，体外试验表明，有抗病毒活性，同时还有止血、解毒等作用，因此，关于该化合物对人体健康的影响一直受到广泛关注。但是，在分子水平上，该化合物在体外实验中可以导致DNA双链结构的断裂，在细胞水平上，该化合物被发现还可能会导致染色体畸变和姐妹染色体互换，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）将其归为2B类致癌物质。

蒲公英、忍冬藤、苍耳子等传统中药材中咖啡酸含量的测定方法的报道较多，主要采用的是高效液相色谱法，紫外检测器进行定量分析，高效液相色谱-串联质谱的检测方法也有少量报道。如杨雄志（广东药学院学报,2007,23(2):144-145.）采用高效液相色谱法，用依利特BDS C18色谱柱进行分离，甲醇/磷酸盐缓冲液为流动相，紫外检测器进行定量，建立了清咽宁喷雾剂中咖啡酸含量的检测方法。刘燕等（华西药学杂志,2010,25(2):198-199.）采用甲醇水溶液对蒲公英中的咖啡酸进行水浴回流提取，经C18色谱柱分离后，紫外检测器进行定量，建立了蒲公英中咖啡酸含量的HPLC检测方法。许高燕等（分析科学学报,2006,22(5):567-569.）将水溶性迷迭香提取物用甲醇超声提取，提取液过滤膜后直接采用高效液相色谱-串联质谱测定其中咖啡酸的含量，建立方法的检出限为5ng/mL。

咖啡酸也是烟叶多酚物质的一种，在烟叶中也有一定的含量分布。彭友元等（分析实验室,2006,25(2):92-96.）将烟叶烘干，研成粉末，经乙醇水溶液超声提取后采用毛细管电泳电化学检测法同时测定了含咖啡酸在内的几种多元酚的含量。朱瑞芝等（分析实验室,2009,28(10):108-112.）也报道了采用高效液相色谱-串联质谱测定烟叶中咖啡酸含量的方法。

关于卷烟主流烟气中酚类化合物的测定主要集中于邻-苯二酚、对-苯二酚、苯酚、邻-甲酚、间-甲酚等几种高度关注的酚类化合物。如中国专利200910066382.7公开了一种测定卷烟主流烟气中邻-苯二酚、对-苯二酚、苯酚、邻-甲酚、间-甲酚等几种主要酚类化合物的方法，该测定方法是利用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的主要酚类化合物，用乙酸水溶液萃取后过滤，采用二维液相色谱分离系统串联荧光检测器进行检测，测定卷烟主流烟气中这几种酚类化合物的含量。

卷烟在燃烧过程中，发生了蒸馏、干馏、热解、合成、冷凝等多种物理和化学反应，形成大量新生化合物，咖啡酸在卷烟主流烟气中的含量采用何种方法进行测定，相关文献报道较少，截至目前，尚未发现国内外有采用高效液相色谱-串联质谱仪测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的任何专利和文献报道。而且，烟气成分非常复杂，基质干扰严重，咖啡酸在烟气中的含量又较低，已经建立的烟气中酚类化合物的检测方法能否适用于烟气中咖啡酸的测定尚未可知。

2001年Hoffmann与其研究者对1991年的有害成分清单进行了修订和补充，将咖啡酸列为卷烟烟气的69种有害成分之一，2002年Rodgman和Green对烟气中已报道的有害成分进行了总结，也将咖啡酸列为149种卷烟烟气有害成分之一。因此，建立一种能够快速、准确、分离效果好、灵敏度高的卷烟主流烟气中咖啡酸含量的检测方法，是烟草行业当前的一项迫切任务，对于研究和评价吸烟与健康问题也具有十分重要和迫切的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的方法，该方法是一种前处理简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短、检测灵敏度高的高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的方法。

本发明采用的技术方案是提供一种高效液相色谱-串联质谱测定卷烟主流烟气中咖啡酸含量的方法，该方法包括如下步骤：

(1)用滤片捕集卷烟主流烟气中的咖啡酸，用甲醇萃取滤片，得到萃取液；

(2)用高效液相色谱/串联质谱仪测定步骤(1)得到的萃取液；

(3)采用外标法定量分析得出咖啡酸含量。

优选地，步骤(1)所述的收集条件为将待测卷烟在GB/T16447-2004规定的烟草及烟草制品调节和测试的大气环境条件下平衡48h。

优选地，步骤(1)所述滤片为剑桥滤片。

优选地，步骤(1)所述甲醇用量为40ml。

优选地，步骤(2)中用于测定的萃取液为0.5-1.0ml。