[发明专利]一种构建人银屑病小鼠模型的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，具体涉及一种构建人银屑病小鼠模型的方法，以及其在药物筛选中的应用。 

背景技术

银屑病是人类最常见的一种皮肤疾病。典型的皮肤表现是境界清楚的具有银白色鳞屑的红色斑块。轻者可表现为几个银币大小的肘膝部位斑块，重者也可以全身皮肤受累。难于根治，易复发是该病在临床上的一个重要特征。银屑病的病因十分复杂。到目前为止，该病的具体病因还没有定论，研究提示该病的发生主要与遗传因素，感染，代谢障碍，免疫功能障碍，以及内分泌障碍等多种因素的共同作用有关。 

该病的组织病理表现为表皮角化过度伴有角化不全，角质层内或棘层上部可见中性粒细胞聚集，分别称为Munro微脓肿和Kogoji海绵状微脓肿，棘层增厚，表皮突下延，末端常增宽，真皮乳头呈杵状，顶部变薄，血管扭曲扩张，真皮上部慢性炎细胞浸润。 

银屑病的病理生理的特点在于各种细胞间非常复杂的相互作用，特别是表皮细胞与各种免疫细胞之间的相互影响。几十年来，关于是表皮细胞还是免疫细胞缺陷引起银屑病的争论还在继续。 

由于极少有自发的动物银屑病，如何制备人银屑病动物模型长期以来都是该病研究的一个主要挑战。目前最可靠的动物模型是将患者受累皮肤移植到联合免疫缺陷的小鼠。该模型虽然忠实地模拟了银屑病的局部表现，但却排除了全身免疫系统的影响。另外，该模型制备方法复杂，材料来源有限，保存时间短，因此难以大规模地使用。 

近来，Van der Fits L等博士发现表皮涂抹TLR7/8激动剂Imiquimod可引起明显的银屑病样的皮肤病理表现，并有证据提示与人银屑病相似，Th17和树突状细胞在引起这些病理方面有非常重要的作用（J Immunol182：5836-45）。然而，该模型虽然制备方便，但最近发现，成功用于人银屑病治疗的TNF抑制剂反而可能促进Imiquimod引起的皮肤病理表现（Int J Immunopathol Pharmacol.24:509-15.），说明该模型与人银屑病在致病机理上可能有很大的不同。通过基因改造，目前已建立了多种银屑病的小鼠模型。然而根据 Martha-Estrella Garcia-Perez等博士(Recent Patents on Inflammation&Allergy Drug Discovery2012,6,3-21)以及Frank O.Nestle等博士（New England Journal of Medicine2009，361：496-509）最近所作的综述，这些模型都有一些不同的缺陷。 

例如，转录因子NF-κB在慢性炎症反应中发挥非常关键的作用。IKK2是NF-κB信号通路被胞外刺激激活所必需的一种蛋白激酶。正常情况下，NF-κB与抑制蛋白IκB结合而被留在细胞浆中。当细胞受到刺激后，IKK2被激活进而磷酸化IκB，并引起后者被泛素系统识别和降解。因而导致NF-κB被释放出来，进入细胞核发挥其转录因子功能引起一系列的炎症因子的表达，引起或放大炎症反应。现有技术分别改造IKK2/NF-κB信号通路上多个不同的基因都出现了银屑病样的病理表现（Vet Pathol45：563-575），充分说明了该信号通路在银屑病中的关键作用。Haase博士的实验室首先发现表皮特异的IKK2基因敲除小鼠可以引起全身性的银屑病样病灶（Nature.417:861-6）。组织学分析显示这些病灶与人银屑病的病理改变非常相似：表皮细胞增生，颗粒层缺失，局部角化不全，真皮中巨噬细胞，T细胞，肥大细胞以及粒细胞的浸润，粒细胞也侵入表皮并形成微脓肿。然而，这些小鼠在出生后不久就死亡，限制了该小鼠作为银屑病动物模型的应用。这个实验室还培育出了可诱导的表皮特异IKK2基因敲除小鼠（J Invest Dermatol.126:614-20.）。但这些小鼠有明显的非特异性的基因敲除，给这些小鼠作为银屑病动物模型带来了一个非常不利的因素。 

可见，人们需要更多的其它简便、经济、与人银屑病表现高度相似的动物模型，用于研究该病的发病机制和筛查对治疗这种疾病的可能有效的候选药物。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种简便、经济的人银屑病小鼠模型的建立方法，并采用本发明构建的人银屑病小鼠模型用于银屑病治疗药物的筛选，可以简便、快速和高效的实现对抗银屑病药物的定性和/或定量评价。