[发明专利]一种杜梨组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养技术的植物组织快繁，具体涉及一种杜梨组培快繁方法。

背景技术

梨为蔷薇科(Rosaceae)，梨亚科(Pomoideae)之梨属(Pyrus L．)植物。梨是一种重要的果树，在我国水果产量中，仅次于苹果、柑橘，居第三位。梨在生产中均采用嫁接繁殖，砧木是果树嫁接的重要基础，与果树的生产密切相关。优良砧木的筛选具有调节树势，延长结果年限，甚至调节果实品质等。杜梨（Pyrus betulaefolia Bunge.）是梨主要砧木之一，由于其适生性强，耐旱，根深、发达、耐瘠薄，抗盐碱能力强，在中性土及盐碱土中性土中均能正常生长，是我国主要梨砧木，生产中广泛应用。

目前，杜梨繁殖以实生播种为主，由于实生苗具有不同基因型，繁育的苗木生长势、抗病性、亲和力等方面均存在较大差异。此外，在葡萄、苹果、梨上已有研究表明，嫁接于不同砧木上接穗的生长势、抗病性、果实品质等也存在较大的差异。因而，生产中有必要选择基因型一致砧木用于苗木快繁。

对砧木进行无性繁殖，可以获得基因型一致的苗木，通常采用压条、扦插、组织培养等方式进行无性繁殖，组织培养由于不受季节、环境等因素的影响，被认为是效率最高的快繁方式。然而木本植物组培快繁普遍存在生根困难、移栽成活率低等问题。为解决试管苗生根，目前常用方法有以下几种：一是筛选合适生根培养基，在生根培养基上直接培养，常用生长素有NAA和IBA，单独使用或混合使用，同时通过降低培养基无机盐浓度和调整基本培养基组成来促进生根。二是瓶外生根，先将试管苗的茎段进行激素处理后，转到蛭石、珍珠岩、泥炭、苔藓等基质中来完成瓶外生根过程。但是瓶外生根的生根率比瓶内生根率略低。三是瓶内二次转接生根，先将试管苗的茎段激素处理后，再转到空白培养基上诱导生根。这些方法在不同植物上都有成功的报道，但是不同植物采用的培养基配方以及培养方式存在极大差异。

有关梨试管苗生根培养，研究认为培养条件显著影响试管苗生根，对砀山酥梨瓶内直接生根根数的影响程度大小依次为：IBA>间苯三酚>NAA>基本培养基。BA-29试管苗生根研究表明，IBA和NAA复合处理优于单一处理。不同基因型间，生根条件存在较大差异。相同培养条件下，西洋梨矮化砧BA-29、山梨最高生根率在81.59%和83%，黄花梨生根率仅有4-7.1%，南果梨、黄冠梨、中矮一号、砀山酥梨等生根率均在50%以下。有关杜梨组培快繁研究相对较少，开展研究杜梨组培快繁技术研究，具有极大的实用性和必要性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、高效的杜梨组培快繁方法，可提高杜梨试管苗生根率和移栽成活率，为规模化生产的砧木无性繁殖提供优质的组培试管植株。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种杜梨组培快繁方法，包括外植体的消毒、芽的诱导、愈伤组织诱导、生根诱导、炼苗移栽；在组培快繁过程中，进行二步法生根诱导，先在添加NAA的1/2MS培养基上，暗培养诱导愈伤组织，再转入含IBA的1/2MS培养基上，光暗培养诱导生根。移栽过程也进行二步驯化，先在三角瓶中敞口驯化，再转到栽培基质上驯化。以此实现提高试管苗生根率和移栽成活率。

该方法具体包括如下步骤：

（1）外植体的消毒：将杜梨带腋芽的幼茎作为外植体，切段，消毒，无菌水冲洗；

（2）芽的诱导：将经上述处理的外植体切成单芽茎段，接种于不含任何外源植物激素的MS启动培养基，光照培养25～35d得到无根苗；

（3）试管苗增殖：将无根苗接种于MS增殖培养基上，光照培养25～35d得到试管丛生苗；

（4）生根诱导：

（4a）愈伤组织诱导：选取健壮的1～3cm高的试管丛生苗切分后转入愈伤组织诱导培养基中，暗培养7d，诱导产生愈伤组织；

（4b）诱导生根：将上述获得的具有愈伤组织的试管苗，转入生根诱导培养基中，光照培养25～35d获得生根的试管植株；

（5）炼苗移栽：

将生根的试管植株加水5～10ml，敞口炼苗2～3天，取出组培苗，洗净培养基，每株留叶2～3片，移入泥炭和珍珠岩基质中，加盖遮阳网，继续炼苗20～25d，然后移栽定植。

步骤（1）中，对杜梨带腋芽的幼茎用流水冲洗1～2h，剪取3～4cm带芽茎段，在超净工作台上先以75(v/v)％酒精消毒30s，再用0.1wt％升汞消毒5min，无菌水漂洗4～5次。

步骤（1）中，所述的幼茎为春季萌发的新梢幼茎。