[发明专利]利用凝胶渗透色谱处理生物检材的有机磷农药检验方法

说明书

技术领域

本发明涉及刑事侦查领域的药物、毒物检测方法，特别涉及一种利用凝胶渗透色谱处理生物检材的有机磷农药检验方法。

背景技术

随着技术的进步，对药物、毒物分析检验的要求越来越高，包括高重现性、高回收率、低检出限和操作简单易行等，因而急需建立一种简单、快速、灵敏度和回收率高的前处理方法。目前现有的前处理技术主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃取等，这几种前处理技术都是根据不同化合物的性质对其进行分离提取，存在操作步骤繁琐、容易出现漏检情况。

目前国内外的凝胶渗透色谱研究多集中于对植物性产品如蔬菜、水果、谷物等的处理。由于血液、尿液和肝组织等生物检材中含有的蛋白质及油脂等大分子杂质难以去除，因此还没有针对血液、尿液和肝组织等生物检材中某类毒物的系统检验方法。在国内公安系统的毒物分析检测中，凝胶渗透色谱的应用还处于起步阶段，尚缺少有效可行的方法。因而建立血液、尿液和肝组织等生物检材中常见药物、毒物的凝胶渗透色谱处理技术，并应用于实际办案中是当前的一项关键任务。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种利用凝胶渗透色谱处理生物检材的有机磷农药检验方法，提高对生物检材中蛋白以及油脂等大分子杂质的去除效率，使得对生物检材中的有机磷农药进行检测时分离效果好、灵敏度高。

本发明的技术方案是这样实现的：利用凝胶渗透色谱处理生物检材的有机磷农药检验方法，包括如下步骤：(1)在生物检材中加入有机溶剂A，离心，分离有机相，将得到的有机相浓缩至干，再用有机溶剂A溶解，过有机微孔滤膜后得提取液；(2)提取液进凝胶渗透色谱净化柱，用有机溶剂B淋洗，收集淋洗液，在浓缩仪上吹干，用有机溶剂C溶解后得到待测液；凝胶渗透色谱净化柱的填充相为苯乙烯-二乙烯苯共聚物；(3)利用气相色谱仪对待测液进行检测。

本发明的有益效果是：本发明将凝胶渗透色谱技术应用到毒物分析领域，建立血液、尿液和肝组织中简单、快速、灵敏度和回收率高的前处理技术，缩短前处理时间、减少分析成本、提高检测结果的可靠，以解决毒物分析中检材种类繁多、成分复杂的问题，为提高公安行业毒物分析检验工作的效率提供保障。

本发明优选了提取溶剂，采用凝胶渗透色谱净化，气相色谱检测，建立了一种快速、准确、灵敏地测定血液、尿液、肝组织中8种有机磷农药的理想的方法，具有以下几个优点：

1、简单、高效、自动化的样品前处理方法。

利用乙酸乙酯和环己烷的混合溶液、正己烷和丙酮的混合溶液、乙腈或环庚烷和乙二醇二乙醚的混合溶液作为血液、尿液和肝组织中8种有机磷农药的提取溶剂，采用体积比为1∶1的环己烷和乙酸乙酯的混合溶液作为流动相，使用凝胶渗透色谱对提取液进行净化；能够有效地净化血液、尿液、肝组织提取液中的蛋白、油脂、色素等大分子杂质，实现分离并富集有机磷农药。

2、毛细管气相色谱火焰光度检测器测定生物检材中8种常见有机磷农药。该法检测8种有机磷农药的最小检出质量比范围10～50ng/mL；当使用乙酸乙酯和环己烷的混合溶液作为提取溶剂时，精密度2.1％～9.9％，不同添加浓度的平均回收率60.2～96.2％；当使用环庚烷和乙二醇二乙醚的混合溶液作为提取溶剂时，能够更加有效地将血液、尿液和肝组织中的有机磷农药提取出来，并且提取液中的蛋白、油脂、色素等大分子杂质含量较少，有利于凝胶渗透色谱系统更加彻底地对提取液进行净化，精密度2.1％～6.4％，不同添加浓度的平均回收率70.1～97.5％。通过GC/MS对8种常见的有机磷农药进行确证，空白样品中未检出8种有机磷农药。

3、对凝胶渗透色谱净化条件进行了优化、对外标法定量、添加回收率以及GC-FPD检测进行了研究，建立了一种快速有效的检测血液、尿液和肝组织中有机磷农药的较为理想的方法。优选乙酸乙酯和环己烷的混合溶液、环庚烷和乙二醇二乙醚的混合溶液、环己醇和环己酮的混合溶液或异戊醚和丁酸丙酯的混合溶液作为提取溶剂，并且使用凝胶渗透色谱净化技术，能够提高对血液、尿液和肝组织中蛋白以及油脂等大分子杂质的去除效率，并且采用GC-FPD检测8种有机磷农药，使得本发明具有分离效果好、灵敏度高等优点。

附图说明

图1-1空白血液样品GC-FPD色谱图；图1-2空白尿液样品GC-FPD色谱图；图1-3空白肝组织样品GC-FPD色谱图；

图1-4为8种有机磷农药标准品GC-FPD色谱图(从左到右分别是氧乐果、甲拌磷、乐果、乙拌磷、甲基对硫磷、马拉硫磷、倍硫磷、乙基对硫磷)；