[发明专利]一种利用核糖体蛋白S29鉴定烟草生物毒性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及烟草检测领域，具体涉及一种利用核糖体蛋白S29鉴定烟草生物毒性的方法。

背景技术

吸烟可以导致健康问题，这已在多项流行病学调查和实验研究中得到证实。然而由于许多烟民吸烟上瘾或者不想戒烟，世界范围内烟草消费有增无减，我国是烟草生产和消费大国。在当前和今后较长的一段时间内，庞大的烟民队伍将依然存在。因此，降低卷烟的危害，对于发展烟草工业，保护烟民健康具有重大意义。

为了降低吸烟对人体的危害，国内外烟草界已经在改进滤嘴、处理烟草烟丝等方面做了很多工作。但是对于如何检测和鉴定烟草生物毒性需进一步研究。由于烟草烟气是一种非常复杂的混合物，各成份之间存在相互作用，因此，对其中单独某一成份的研究并不能显示整个烟气混合物的生物活性。所以，在评价烟草烟气的毒性过程中应该对整个烟气混合物进行综合评价。短期体外试验的价值已经得到了科学界、政府机构和公司的一致认可，它具有快速廉价的优点，并且能对毒性效应进行定量评价。

卷烟烟气是一个复杂的混合物，应该用多种试验从不同的生物学终点进行评价。如果能够为吸烟与健康建立一个快速简便的评价体系，并为降低卷烟危害的研发和评价方法提供依据和研究方向，可为行业和卫生界提供吸烟与健康新的评价方法和思路，具有重大社会效益。

表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization-Time of Flight-Mass Spectrometry，SELDI-TOF-MS）技术是最近几年才发展起来的一种新的蛋白质组学研究方法，由蛋白质芯片、飞行时间质谱仪及蛋白质芯片系统分析软件三部分构成，其中蛋白质芯片是核心技术。

SELDI-TOF-MS技术根本的原理是通过使用特异的探针表面俘获蛋白质来增强亲合力。SELDI可以克服二维凝胶电泳存在的内在问题，包括疏水性问题、强酸性、强碱性的蛋白质的分离、膜蛋白的分离问题、低分子量检测的灵敏性、低丰度蛋白质的灵敏性问题。蛋白质只要与SELDI蛋白质芯片结合，就可通过质谱仪按蛋白质质量、电荷比（m/z）的不同及量的多寡、位置、强弱不同的峰直观的表现出来，进而形成相应图谱，用于分析、判别。同时，SELDI技术是从基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI）基础上改进而来的，由于部分非特异结合的物质在分析前已被洗去，因而出现的峰非常一致，有利于后期分析。

使用SELDI-TOF-MS技术检测到的绝大多数差异性蛋白其究竟为何种蛋白质、所具有的生物学功能及其在吸烟对生物体造成损害的过程中所起到的作用目前尚未知，存在的研究空间很大。如何纯化、分析和鉴定这些差异蛋白也成为通过质谱技术从生物学角度评估卷烟生物毒性的一个重要部分。

发明内容

本发明提供了一种利用核糖体蛋白S29鉴定烟草生物毒性的方法，该方法准确率高，鉴定结果可靠。

一种利用核糖体蛋白S29鉴定烟草生物毒性的方法，包括：

（1）利用受检烟草建立大鼠烟气急性中毒模型；

（2）获取所述大鼠烟气急性中毒模型的血清；

（3）检测血清中核糖体蛋白S29的表达强度，鉴定受检烟草的生物毒性；

鉴定方法为：

若血清中核糖体蛋白S29的表达强度高于718.3，则受检烟草生物毒性低；若血清中核糖体蛋白S29的表达强度低于718.3，则受检烟草生物毒性高；

所述核糖体蛋白S29的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。由于所述核糖体蛋白S29在不同物种之间呈现高度序列保守性，因此，除大鼠外，还可利用其他实验动物来建立烟气急性中毒模型。

718.3的表达强度是测试获得的、低焦油烟组大鼠和普通烟组大鼠中核糖体蛋白S29表达强度的平均值。

步骤（1）中，大鼠烟气急性中毒模型的建立方法为：

利用自动吸烟机将受检烟草的烟气与清洁空气混合，将混合气体恒流送达各容鼠器的吸烟孔供试验大鼠吸入，构建大鼠烟气急性中毒模型。

烟气与清洁空气的体积比优选为1:2。

试验大鼠吸入混合气体的时间优选为3天，每天吸入1小时。

步骤（3）中，利用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱法检测核糖体蛋白S29的表达强度。