[发明专利]牛脂肪酸转运蛋白1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法

权利要求书

1.一种牛脂肪酸转运蛋白1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）利用生物信息学软件分析牛FATP1基因5’侧翼启动子序列，预测出核心启动子序列和转录因子结合位点；

（2）根据pGL3-Basic真核表达载体中多克隆位点区，结合已获得启动子片段以及限制性内切酶酶切反应效率，选取Kpn?和Xho?两种限制性内切酶酶切位点用于构建pGL3-Basic-Promoter真核表达载体；设计带有酶切位点的特异性引物，将酶切位点分别加在上下游引物的5’端，并在酶切位点的5’端添加2～3个保护性碱基；

（3）将包含牛FATP1基因第一外显子的5’侧翼启动子序列插入pMD19-T载体，构建包含牛FATP1基因第一外显子的5’侧翼启动子序列的pMD19-T-Promoter载体；

（4）将牛FATP1基因启动子片段插入pGL3-Basic载体的Kpn?与Xho?位点间，构建牛FATP1基因启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic-Promoter。

2.根据权利要求1所述的牛脂肪酸转运蛋白1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法，其特征在于：步骤（2）中所述的带有酶切位点的特异性引物包括，上游引物5'-GGGGTACCGCATCCCCACTCAACTAATAC-3'，以及下游引物5'-CCGCTCGAGCCACAG AGTCCTTTATTTGC-3'，带下划线的序列为引入的两个带保护碱基的酶切位点Kpn?和Xho?位点。