[发明专利]一种测定血清中肌红蛋白含量的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种测定血清中肌红蛋白含量的检测试剂盒。

背景技术

急性心肌梗死（AMI）是发病率和死亡率较高的疾病之一。目前AMI检测的主要生化标志物有肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDL）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）和肌红蛋白（MB）等。但是CK-MB、LDL、cTnT在诊断心肌梗死时的敏感性没有MB高，MB是迄今为止公认的心肌损伤早期标志物。MB是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，它是组成骨骼肌和心肌的主要蛋白质，分子量为17.8 KD。由于其分子量小，可以很快的从缺血的心肌组织释放入血，在心肌梗死发病后1-3小时血中浓度迅速上升，6-7小时达峰值，12小时内几乎所有心肌梗死患者MB都有升高，且升高幅度较大。而且由于MB半衰期短，只有15分钟，胸痛发作后6-12小时不升高可排除心肌梗死。MB是从肾脏清除，在发病18-30小时内可完全恢复到正常水平。所以MB测定有助于在心肌梗死病程中观察有无再梗死或者梗死再扩展。心肌梗死患者血清MB的升高幅度和持续时间与梗死面积和心肌坏死程度呈明显正相关。如果血清MB持续不降或反而升高或下降后又异常升高，说明梗死面积继续扩大，心肌坏死加重或有新的梗死发生。由于MB诊断心肌梗死的敏感性和特异性很高，所以早期测定MB对及早诊断心肌梗死有一定的参考价值。

胶乳颗粒增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。PETIA法大体分为两种。一种是散射比浊检测法；另一种是透射比浊检测法。这两种方法的基本原理非常相似，都是在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。而且，反应液散光性能或透光性能（即吸光度）的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性,在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。PETIA检测方法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定。抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤，几分钟就能获得结果，省时省力。此外，纳米免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量。免疫比浊法的灵敏度虽然比ELISA法差一些，但足于检测到健康人血浆中许多标志蛋白的下限值，可完全满足临床检测要求。

目前检测MB的方法主要有化学发光法、酶联荧光分析法、放射性免疫法和酶联免疫法。但是这些方法都有其局限性，如，化学发光法和酶联荧光分析法价格昂贵，需要专门仪器和专业人员操作，只适合中心实验室使用；放射性免疫法会对环境造成污染；而酶联免疫法测定周期长，不适合急诊的快速检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定血清中肌红蛋白含量的检测试剂盒，它操作简便、灵敏度高、特异性好，能快速的测定结果、且测定结果准确性高。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明采用以下技术方案：试剂盒是由试剂R1、试剂R2及校准品三部分组成，试剂R1为磷酸盐缓冲体系，试剂R2的组成为交联肌红蛋白抗体的致敏乳胶溶液，校准品为重组人肌红蛋白溶于磷酸缓冲液中，同时添加甘油、蔗糖、BSA、甘露醇、山梨醇作为保护剂，叠氮钠作为防腐剂。

所述的磷酸盐缓冲体系R1，其特征在于含有PH=7.0-7.6的磷酸盐缓冲液30-80mmol/l、聚乙二醇6000-10000 60-120 mmol/l和乙二胺四乙酸二钠10-20mmol/l。

所述的交联肌红蛋白抗体的致敏乳胶溶液R2含有肌红蛋白抗体包被的致敏乳胶颗粒、PH7.0-7.6的磷酸盐缓冲液40-100 mmol/l。

所述的校准品包含肌红蛋白MB浓度分别为0，62.5，125，250，500 ng/ml的5支校准品。

所述的交联肌红蛋白抗体的致敏乳胶溶液R2致敏乳胶颗粒为聚苯乙烯乳胶粒子，颗粒直径在150-190nm之间。

所述的试剂R2抗体包被过程中，肌红蛋白抗体和聚苯乙烯乳胶粒子包被质量比为1/10-5/10。

所述的试剂R2抗体包被过程中，封闭液组分包括0.5%-1.5%脱脂奶粉、10-60 mmol的甘氨酸。

所述的试剂R2抗体包被过程中，胶乳稀释液组分包括PH7.0-7.6磷酸盐缓冲液 30-80 mmol/l，0.5%-1.5%脱脂奶粉，0.9%NaN3。

    本发明具有以下有益效果：它操作简便、灵敏度高、特异性好，能快速的测定结果、且测定结果准确性高。