[发明专利]蛋白酶

权利要求书

1.分离的多肽，其具有蛋白酶活性并具有至少78℃的解链温度(T_m)，如通过差示扫描量热法(DSC)在10mM磷酸钠、50mM氯化钠缓冲液中，pH 7.0，应用1.5℃/分钟的恒定扫描速率进行测定，其中所述多肽选自：

(a)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的1-188、SEQ ID NO:8的1-196、SEQ ID NO:10的1-189和/或SEQ ID NO:12的1-188的氨基酸具有至少60%的同一性程度；

(b)由核酸序列编码的多肽，所述核酸序列在低严谨条件下，与SEQ ID NO:1的499-1062、SEQ ID NO:7的577-1164、SEQ ID NO:9的586-1152和/或SEQ ID NO:11的502-1065的核苷酸杂交；

(c)由核酸序列编码的多肽，所述核酸序列与SEQ ID NO:1的499-1062、SEQ ID NO:7的577-1164、SEQ ID NO:9的586-1152和/或SEQ ID NO:11的502-1065的核苷酸中的任一个具有至少60%的同一性程度；

(d)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NOs:2、8、10或12中任一个的成熟肽的同一性程度为至少大约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%。

(e)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的氨基酸1至188或者SEQ ID NO:8的氨基酸1至196的的差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；和/或

(f)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列具有SEQ ID NO:2的氨基酸1至188，SEQ ID NO:8的氨基酸1至196，SEQ ID NO:10的氨基酸1至189和/或SEQ ID NO:12的氨基酸1至188的氨基酸序列，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸。

2.权利要求1的多肽，其是拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)蛋白酶，优选是源自达松维尔拟诺卡氏菌达松维尔亚种(Nocardiopsis dassonvillei subsp.dassonvillei)DSM 43235的蛋白酶、源自拟诺卡氏菌属菌种(Nocardiopsis sp.)DSM 16424的蛋白酶或者是源自Nocardiopsis alba DSM 15647的蛋白酶。

3.权利要求1的多肽，其中所述的氨基酸差异是保守的氨基酸取代。

4.权利要求1的多肽，其中所述氨基酸序列在所述的指定位点包含至少一个下列的氨基酸：10Y、24S、38T、42G、49T、51T、53Q、54N、82S、86Q、87S、89T、91T、92S、96A、99A、118N、120T、122R、125Q、129Y、130S、131L、135N、147F、151S、165S、166V、171Y、179I和/或186I；优选10Y、38T、82S、99A、118N、120T、122R、125Q、129Y、130S、131L、165S和/或171Y；更优选与95P、100V和/或114I中的至少一个一起；和/或与(H35+D61+S143)一起；其中每个位点对应于SEQ ID NO:2的位点。

5.权利要求1的多肽，其中所述氨基酸序列在所述的指定位点包含至少一个下列的氨基酸：25S、38T、42P、44S、49Q、54R、62S、89S、91S、92S、95A、99Q、100I、114V、120T、125Q、129Q、131L、135N、147F、151S、165S、166F、171Y、176N、179L、180S、184L和/或185T；优选25S、38T、42P、44S、54R、62S、125Q、131L、165S、171Y、176N、179L、180S、184L和/或185T；更优选与24A、51V、53E、86A、87T、96I和/或186L中至少一个一起，和/或与(H35+D61+S143)一起；其中每个位点对应于SEQ ID NO:12的位点。

6.分离的核酸序列，包括编码权利要求1-5中任一项的多肽的核酸序列。