[发明专利]移植肾脏器官的冰温保存方法

说明书

技术领域

本发明属于器官移植医学及生物传热领域，具体涉及一种适用于在冰温温度下肾脏器官的保护及保存技术方法。

背景技术

目前中国已成为世界肾器官移植的主要国家之一，而器官保存是器官移植学的三大技术支柱之一。尤其对于异地器官供体来说，由于移植器官保存方法或保存时间的不当造成器官功能受损以致失去移植价值，更成为供体器官短缺问题中的最大憾事，所以人们也意识到现行保存方法在保存时间和质量方面的局限性。众所周知，生物组织保存通常都采用低温冷冻方式，但是对于移植器官来说如果采用冻结温度保存，由于细胞内外结冰将对器官造成致命的伤害。目前对异地供体器官保存采用的方法是，对离体的器官用4℃左右的器官保护液进行灌冲，然后将器官浸在保护液中放到冰袋及保温箱中保存至移植手术前。从器官摘取保存至移植手术前这段时间，目前在临床上肾器官要求一般不要超过24小时为最佳，因为保存的时间与器官功能细胞损伤的程度成正比。如果能保证器官细胞不损伤的条件下，设法使这段时间能够延长，这将对移植手术操作具有较大的实用意义和临床价值。本发明提出的在亚临界相变温度范围进行肾脏器官的低温延时保存，是一个不同于传统低温保存所面临的新方法。灌冲的器官保护液温度每降低1℃，都将带来许多问题。

本发明在深入研究非相变极限温度用于复杂生物组织保存机理的基础上，提出了采用冰点温度或接近相变温度下的肾脏器官延时保存的方法。

发明内容

本发明的目的是，提供一种移植肾脏器官的冰温保存方法。

本发明通过下述技术方案予以实现。移植肾脏器官的冰温保存方法以25～30kg动物猪肾脏为对象，保存方法包括以下步骤：

（1）气管内乙醚麻醉，取上腹正中切口，切取左侧或右肾脏作为供肾，供肾切取后立即对肾动脉进行插管；

（2）用0～1℃器官保护液经重力加压灌冲，灌冲流量为2.7～2.8ml/s，平均降温速率为6.00～6.33℃/min，灌冲至肾脏静脉流出的保护液温度为2.0～4.0℃时停止；

（3）灌毕后将肾脏放入含有200～300ml器官保护液的灭菌薄膜袋中密封，然后置于0±0.15℃的恒温箱中保存。

“冰温”是指从摄氏O℃起至各生物组织即将开始结冰时为止的温度带，也即0℃以下至冰点以上的温度区域。温度越低对生物保存越有利，但过低的温度将使细胞中的微管结合蛋白(MAP)失去结合微管的能力，使细胞膜的脂质由液晶态转变为凝胶态，细胞膜流动性下降，破坏了细胞内外的渗透压平衡，导致物理、化学以及生物因素等外界损伤造成细胞死亡。对于肾脏器官组织，经测试其冰温温度为‐0.8℃。所以要充分利用该相变，尽量保证肾脏器官由常温至冰温的（相互）转换中，维持细胞膜液晶相不变。

本发明所述保存方法的关键是控制灌冲所用器官保护液的温度、流量、降温速率以及贮存的温度，与此同时要使器官保护液的结晶温度降低。器官保护液成分的改变在实验中具有一定效果，但在低温条件下药物本身较差的渗透性将阻碍细胞间的质传递，器官保护液的主要作用是为了维持细胞膜完整性和能量供应以避免缺血性细胞损伤，所以单纯依靠保护液无法有效防止（细胞内外）冰晶对细胞的直接损伤。因此改善保护液配方的同时提出最佳的降温速率和保存温度是解决器官延时保存的关键。

本发明的特点和有益效果是：采用冰温技术使器官组织相变温度降低而不冻结实现移植器官的延时保存，同时提出了使器官组织细胞内外渗透压维持平衡的生物热力学条件。通过采用冰点极限温度，实现移植器官的延时保存并能恢复良好功能。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的原理做进一步的说明。需要说明的是本实施例是叙述性的，而非是限定性的，不以此实施例限制本发明的保护范围。

实施例以30kg动物猪肾脏为保存对象，具体方法包括以下步骤：

（1）气管内乙醚麻醉，取上腹正中切口，切取左侧或右肾脏作为供肾，供肾切取后立即对肾动脉进行插管；

（2）用0～1℃器官保护液经重力加压灌冲，灌冲流量为2.7ml/s，平均降温速率为6.33℃/min，灌冲至肾脏静脉流出的保护液温度为3.0℃时停止；

（3）灌毕后将肾脏放入含有300ml器官保护液的灭菌薄膜袋中密封，然后置于0±0.15℃的恒温箱中保存。