[发明专利]一种抗肿瘤血管生成单克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤治疗领域，尤其涉及一种抗肿瘤血管生成单克隆抗体的制备方法。

背景技术

肿瘤生长依赖血管生成。1971年，哈佛大学医学院的Folkman博士研究发现：当肿瘤生长到一定程度的时候，需要建立自己的血管系统以供应肿瘤细胞生长所需的氧气和营养物质。

小于3mm³的肿瘤不需要血管，其营养物质的供应通过体液渗透来获得；当肿瘤生长在一定程度时，肿瘤细胞释放出一些促血管生成物质，诱导肿瘤血管的形成；肿瘤细胞通过血管获得营养供应，并通过血管扩散肿瘤细胞。阻断肿瘤血管生长则使肿瘤细胞得不到氧气和营养供应而萎缩。这就是抗血管生成治疗肿瘤的理论依据。

值得注意的是，血管内皮生长因子(VEGF)与血管内皮生长因子受体(VEGFR)之间的结合是肿瘤血管生成的关键。

研究表明，血管内皮生长因子(VEGF)与血管内皮生长因子受体(VEGFR)的结合是触发血管生成的关键步骤。VEGF共有A、B、C、D、E五种不同的同形体(isoform)。VEGFR共有1、2、3三种不同的同形体。阻断它们之间的结合则抑制肿瘤血管生成。Avastin是一个VEGF-A的单克隆抗体。其作用机制是通过与VEGF-A结合，特异性阻断其与受体VEGFR-1或VEGFR-2的结合来达到抑制血管生成的目的。

而AVR2是比Avastin更为有效的抗血管生成药物，作为VEGF-A的单克隆抗体，Avastin只能阻断VEGF-A的诱导血管生成作用，而AVR2(抗VEGFR2的抗体)则可以同时阻断VEGF-A，VEGF-C，VEGF-D和VEGF-E的作用，因而具有更有效的抗血管生成效果。

与其它抗肿瘤药物相比，单克隆抗体药物专一性强，副作用小，效果显著。

①传统的化学类抗肿瘤药物大多为小分子化学药物。它们的作用机理多是通过阻断细胞DNA复制来实现的。它们在杀死肿瘤细胞的同时也杀死大量的正常细胞。

②单克隆抗体药物利用抗体与病原蛋白高度特异性结合的属性。能够专一性地杀死肿瘤细胞，而对正常细胞不造成伤害。

基于单克隆抗体的这个优点，目前世界上销售最好的抗肿瘤药物基本上都为单克隆抗体药物。

抗血管生成是一种全新的抗肿瘤治疗策略。

FDA迄今批准了约20种抗肿瘤药物。这些大多针对肿瘤细胞表面所表达的特定抗原。如抗乳腺癌药物Hercerptin就是针对乳腺癌细胞表面蛋白HER2；Rituxin则是针对淋巴细胞表面抗原CD-20；Erbitux则针对癌细胞表面的EGFR受体。由于这些细胞抗原只在特定的某种类型的肿瘤细胞上表达。因此它们只能针对这部分肿瘤细胞发生作用。

此外，这类药物很难进入到实体肿瘤的内部起作用，从而限制这些药物发挥功能。这使得人们重新思考新的肿瘤药物治疗策略，就是要从全局出发，不仅针对肿瘤细胞，更要针对负责为肿瘤细胞营养运输通道---肿瘤血管。抑制肿瘤血管生成，切断其“粮道”，釜底抽薪，最大限度地控制和杀灭肿瘤！这就是全新的抗血管生成治疗策略。

针对肿瘤血管的药物与针对肿瘤细胞本身的药物相比，具有很大优越性：第一，几乎所有的实体肿瘤生长都需要生成血管，故抗瘤谱广；第二，血管内皮位于血管内壁，药物易接触，且血管生长因子受体多位于血管内皮细胞表面，更容易为药物所攻击；第三，肿瘤血管内皮细胞相对稳定，变异频率远远小于肿瘤细胞本身。针对肿瘤血管的药物不容易产生耐药性。第四，除创伤愈合，女性孕期循环等情况外，血管新生在成人状态下罕见，所以对其它正常生理过程影响细微。

因此，Avastin作为唯一的一个抗血管生成抗体，一上市就获得极大成功。

VEGFR2是更为有效的抗血管生成靶点。由于Avastin的成功，世界上多个国家的制药公司都在研发抗血管生成类药物，但它们大多数都是Avastin的仿制或改良产物。

传统的单克隆抗体技术为杂交瘤技术，杂交瘤单克隆抗体的获得需要经过小鼠免疫及杂交瘤筛选等步骤。这些步骤费时费力，动物细胞的培养也需要花费大量成本，同时也增加病毒污染的风险。杂交瘤技术为小鼠来源，需要经过人源化才能用于临床。极大增加了药物开发的技术风险及研发成本。

抗体库技术形成于1991年。该技术无需经过动物免疫过程，大大减少了抗体制备周期。此外，该技术可以直接获得人源化抗体，从而绕过了抗体药物开发中的另一个专利技术密布的雷区---抗体人源化。