[发明专利]一种人胰岛素原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种人胰岛素原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

胰岛素原(Proinsulin，PI)是由β细胞初始分泌的未成熟胰岛素，是一条86个氨基酸组成的长肽链，简称胰岛素原。是胰岛素的前体物质，由胰岛素和C肽组成，具有双重免疫活性，既可与胰岛素抗体结合，又可与C肽抗体结合。胰岛素原由胰岛β细胞合成和分泌，主要在肾脏分解代谢。生理情况下，只有极少量的胰岛素原释放入血，在病理情况下，胰岛β细胞释放胰岛素原增多，血中胰岛素原水平升高。胰岛素原的生物学作用同胰岛素基本一样，只是活性较弱，生物合成的胰岛素原在外周利用葡萄糖的能力只有胰岛素的5％-10％，但它抑制肝脏释放葡萄糖的能力则为利用外周葡萄糖能力的1.5倍。

I型糖尿病由于胰岛胰岛素合成和分泌极度下降，刚合成的胰岛素原在未转变为胰岛素的情况下即释放入血，造成血浆胰岛素原升高。胰岛β细胞瘤、家族性高胰岛素血症患者血浆胰岛素原水平明显升高；慢性肾功能不全时，胰岛素原的分解代谢降低，可致血浆胰岛素原升高；甲亢时亦可出现血.浆胰岛素原水平升高。因此，胰岛素原的检测对以上情况的诊断具有重要的临床意义。

正常人空腹时血中胰岛素原的值约为20-240pg/ml，胰岛素原含量过高或过低都会引发其他疾病，为了检测人体内较低浓度的胰岛素原含量，对胰岛素原试剂盒的检测灵敏度提出了更高的有要求。

目前，胰岛素原的检测方法主要有放射免疫分析法(RIA)(S.J.Rainbow等，Diabetologia1979；17：229-234)、酶联免疫分析法(EIA)和化学发光免疫分析法(CLIA)。其中放射免疫分析法必须使用放射性标记物，对操作人员存在危害，同时标记物稳定性较差，且废弃物难以处理，已经逐步被淘汰。酶联免疫分析法(EIA)存在检测范围窄，灵敏度较低，重复性较差等缺点，国外有瑞典Mercodia公司的胰岛素原酶联免疫法试剂盒，其技术工艺优于一般酶联免疫分析法试剂盒，灵敏度和质量较好，但其制备方法由企业作为技术秘密处理，未见于国内外文献和报道，同时价格偏贵，不利于推广使用。

化学发光免疫分析法是取代放射免疫分析法和酶免疫分析法的主流分析技术，主要原理是所采用的信号物既不是放射物也不是呈现被催化后显示颜色的物质而是化学发光底物，这种发光底物可以在催化剂的催化后从激发态中间体回到稳定基态时发射出光子，通过发光信号测量仪器检测光子数可以实现检测。化学发光免疫分析法的主要优势是灵敏度更高。

目前市场已出现了已通过注册审批的人胰岛素原化学发光免疫分析法试剂盒，其基本原理为：采用了一株单克隆抗体直接标记了发光物质异鲁米诺衍生物，另一株抗体标记了异硫氰酸荧光素(FITC，Fluorescein Isothiocyanate)，磁微粒偶联羊抗FITC抗体，形成磁微粒-羊抗FITC抗体-FITC抗体-PI-发光标记抗体复合物，在碱性环境发光标记物发光，由检测器检测到发光信号。此胰岛素原化学发光免疫分析试剂盒虽然采用了化学发光免疫分析法，但其公布的灵敏度等指标相比酶联免疫法没有明显优势，同时检测波动大、重复性差，其设计上主要存在以下缺点：1.采用异鲁米诺直接标记抗体的发光效率低，标记物不稳定，这种直接标记法都属于瞬间发光型(即整个发光过程在不到1s内完成)，不容易保证结果的重复性，同时检测波动大；2.采用FITC与羊抗FITC系统，羊抗FITC作为多抗，取自羊的血清，血清中的复杂成分例如蛋白等会对检测造成干扰；同时不同批次的羊抗FITC对FITC的亲和力和反应速度均不同，会影响每批的检测效果，无法实现生物素亲和素系统的稳定的层级放大作用，对灵敏度没有有益效果，并会出现批内和批间重复性差的缺点。同时，该胰岛素原磁微粒化学发光免疫分析试剂盒的制备方法细节也被厂家作为技术秘密保护，现国内外也未查到胰岛素原化学发光免疫分析试剂盒制备方法的相关资料。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：弥补上述人胰岛素原试剂盒中存在的不足，提出一种人胰岛素原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，此试剂盒具有检测灵敏度高、重复性好、成本低等特点。

根据本发明的试剂盒组份包括：胰岛素原抗试剂1、胰岛素原抗试剂2、磁分离试剂、胰岛素原校准品、化学发光底物、清洗液。

优选地，所述胰岛素原抗试剂1的主要成分是生物素N羟基丁二酰亚胺酯与胰岛素原单克隆抗体的偶联产物。

优选地，所述胰岛素原抗试剂2的主要成分是碱性磷酸酶与胰岛素原单克隆抗体的偶联产物。