[发明专利]一种乙脑/西尼罗嵌合病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种乙脑/西尼罗嵌合病毒及其应用，特别涉及一种以乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/西尼罗嵌合病毒及其应用。

背景技术

西尼罗病毒（West Nile virus,WNV）是黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus）的重要成员。该属还包括许多重要的人畜共患病病原体，如黄热病毒（Yellow Fever virus，YFV）、流行性乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis virus，JEV)、登革病毒（Dengue virus，DENV）和蜱传脑炎病毒（Tick-borne Encephalitis virus，TBEV）等。西尼罗病毒的贮存宿主是鸟类，通过蚊虫叮咬而传播给人类，进而导致西尼罗热和西尼罗脑炎，后者的病死率高达16%。该病毒起初仅散在流行于东半球的非洲、中西亚、地中海及欧洲地区，1999年首次传入西半球的美国纽约。据美国CDC报告，截至2012年，美国已有48个州有病例报告，感染人数近8万人，死亡约1500人。西尼罗病毒已成为美国最重要的脑炎类病毒。我国虽未见该病毒暴发流行，但我国具备西尼罗病毒传播的生态环境和条件，而且随着全球气候的变暖及国际交往的日益频繁，该病毒传入我国的危险性也显著增加。

西尼罗病毒是有包膜的单股正链RNA病毒，其基因组含有一个单一开放读码框，编码3种结构蛋白：衣壳蛋白（capsid protein，C）、膜蛋白及其前体（membrane protein and its precursor，M/prM）及包膜蛋白（envelope protein，E），和7种非结构蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5）。西尼罗病毒的抗原蛋白主要是包膜蛋白E、膜蛋白M和NS1。E蛋白能诱导产生血凝抑制抗体和中和抗体，是主要的保护性抗原。prM蛋白见于未成熟的病毒颗粒，可能在病毒颗粒成熟过程中作为分子伴侣来协助包膜E蛋白的正确折叠，在此过程中进一步经宿主细胞的蛋白酶切割后成为M蛋白。

目前还无特异有效治疗西尼罗病毒感染的药物，因此疫苗接种仍是预防该病毒感染的最有效途径。马用和鹅用的西尼罗病毒疫苗已成功上市。随着病毒学、分子生物学及相关学科技术的发展，人用西尼罗病毒疫苗的研究也已取得了很大进展。近年来，一些新型的西尼罗病毒疫苗，如重组亚单位疫苗、DNA疫苗和复制子疫苗进展迅速。已有的研究显示，上述各类疫苗均能有效诱导小鼠和猴体产生免疫应答，并能提供很好的免疫保护。与上述疫苗类型相比，减毒活疫苗因其具有完整的病毒感染过程，进而能全面诱发机体产生体液和细胞免疫应答而更具优势。随着反向遗传学技术的兴起和完善，人们可以对疫苗进行理性设计。法国巴斯德研究所构建了以黄热减毒活疫苗株YF-17D为骨架的黄热西尼罗嵌合病毒，该疫苗候选株目前已进入II期临床试验，可能成为第一个上市的人用西尼罗病毒疫苗。但近年来，因接种YF-17D疫苗株而引发的脑炎病例时有发生，表明该疫苗的安全性还有待进一步提高。

乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2是由野毒株SA14通过在细胞和动物中不断传代和多轮空斑纯化最终获得。与野毒株SA14相比，SA14-14-2的毒力明显减弱，对成鼠和猴等动物的致病性几乎完全丧失。使用该减毒株研制的乙脑减毒活疫苗在我国使用人群超过3亿，未见因疫苗接种而引发疾病的报告，安全性可靠。同时，SA14-14-2遗传特征稳定，基因组序列明确，与西尼罗病毒基因组具有十分类似的结构特征，非常适合作为基因骨架用于嵌合疫苗的构建。

发明内容

本发明的目的是提供一种以乙脑病毒为基因骨架的乙脑/西尼罗嵌合病毒。

本发明所提供的乙脑/西尼罗嵌合病毒，是将乙脑病毒基因组RNA中编码乙脑病毒prM-EΔ3蛋白的脱氧核糖核苷酸片段替换为西尼罗病毒基因组RNA中编码西尼罗病毒prM-EΔ3蛋白的脱氧核糖核苷酸片段后得到的重组病毒。

其中，prM-EΔ3蛋白表示缺失了E蛋白羧基末端3个氨基酸残基的prM-E蛋白。

在本发明中，所述乙脑病毒具体为乙脑病毒SA14-14-2减毒株；所述西尼罗病毒具体为西尼罗病毒chin-01株。

进一步，所述乙脑病毒prM-EΔ3蛋白为由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白；所述西尼罗病毒prM-EΔ3蛋白为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。