[发明专利]一种快速高效的植物寄生线虫总RNA提取方法及其应用

权利要求书

1.植物线虫组织破碎方法，采用如下步骤：（1）制备玻璃粉末：将普通玻璃破碎后收集过60目筛子的粉末，用浓盐酸洗后用去离子水洗，直至pH7.0，再高温去除RNA酶，冷却至室温备用；（2）搅拌破碎：于无RNA酶离心管中加入玻璃粉末和TRIzol试剂以及线虫体，用微量电动组织匀浆器搅拌玻璃粉末，直至线虫组织破碎。

2.根据权利要求1所述的方法，所述高温去除RNA酶为180℃高温灭菌10h。

3.根据权利要求1所述的方法，所述玻璃粉末与TRIzol试剂的体积比为1：1.6。

4.根据权利要求1所述的方法，所述微量电动组织匀浆器的研磨槌经过DEPC水浸泡处理。

5.一种植物线虫微量总RNA提取方法，为按权利要求1-4任一方法将植物线虫组织破碎后，再提取线虫总RNA。

6.根据权利要求5所述的方法，所述提取线虫总RNA的方法为将线虫组织破碎后的混合物一次离心，上清液用氯仿萃取后二次离心，取上清液加核酸共沉淀剂，1/10体积的3mM醋酸钠和2.5倍体积的预冷无水乙醇后三次离心，取沉淀物用75%酒精清洗，干燥即可。

7.根据权利要求6所述的方法，所述一次离心前可补加TRIzol试剂，使玻璃粉末与TRIzol试剂的体积比至1：4。

8.根据权利要求5所述的方法，所述线虫为侵染前二龄幼虫。

9.根据权利要求5所述的方法，所述植物线虫为大豆孢囊线虫（Heterodera glycines）。