[发明专利]一种降低人OPN基因表达的siRNA及其相关药物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种降低人OPN基因表达的小分子干扰核糖核酸（siRNA）及其相关药物。

背景技术

RNAi的高度特异性和相对宽松的设计条件，使RNAi不仅可以应用于基因功能研究，更广泛的，RNAi将被应用到基于基因组序列的核酸药物研究和药物靶标验证中。

截止2000年末，共计215个基于基因水平治疗的药物在研，其中87个为基因治疗药物，62个DNA疫苗，35个为针对RNA的反义核酸和核酶。具体数据见下表：

截止2000年底，基于基因组的在研药物分布表

由上表可见，RNA攻击核酸制药迄今为止是以反义核酸为主，核酶技术为辅的一个领域。1997年ISIS制药公司的抗病毒反义核酸药物在美国医药食品管理局的批准，为反义核酸药物的发展提供了先例。今年高等动物功能基因组研究正在以更快的速度为反义核酸药物的发展提供靶基因，使反义核酸药物的适用范围从癌症向传染病，心血管疾病，炎症及自身免疫等多方面扩张。2001年8月ISIS将蛋白激酶C的反义核酸药物以2亿美元的高价转让给大制药公司Elililly，2002年4月，世界第二大反义核酸药物公司Genta将其bcl-2的反义核酸药物以4.8亿美元的高价转让给大制药公司Aventis标志了反义核酸药物的发展走向成熟并进入制药业的主流。这不仅是反义核酸的成功，而更重要的是RNA攻击为手段的制药思路和领域的成功。与反义核酸药物相比，siRNA在体外显示出了非常优越的性质。SiRNA和非常好的反义核酸对基因表达抑制都可以达到80-90%以上，但筛选这样的siRNA要相对容易的多。而且，达到同样水平的表达抑制所需的siRNA比反义核酸浓度低10-100倍。不仅如此，siRNA对基因表达抑制的有效时间也比反义核酸有较大的延长（从2天延长到5-7天）。SiRNA在体外显示的这些优越性性质，如果能在RNA攻击制药中体现出来，将为这一领域注入强大的生命力和价值。从哲学的角度，siRNA这一有效的基因操作手段和RNA攻击这一成熟的制药领域的结合是不可避免的。

siRNA一旦进入制药，首先在病毒性传染病如HIV和癌症如白血病的治疗方面形成巨大的经济效益。中国在这两个方面有以百亿的市场，世界在癌症和病毒性传染病的治疗方面在存在大的空白，siRNA的介入可以产生很好的社会作用。如果中国在这一领域实现突前发展，对提高我国制药业在加入WTO后的竞争力有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对人OPN基因，能抑制人OPN基因表达的siRNA用于肿瘤基因治疗，来抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡。

本发明首先提供了一种降低OPN基因表达的小干扰RNA（siRNA），包括正义链和反义链，序列如下：

正义链：5’-CCAUUCUGAUGAAUCUGAUTT-3’（SEQ ID NO:6）；

反义链：5’-AUCAGAUUCAUCAGAAUGGTT-5’（SEQ ID NO:7）。

进一步的，本发明所述小干扰RNA针对的OPN基因RNA干扰靶序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明第二方面公开了一种降低OPN基因表达的shRNA，所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段含有SEQ ID NO：6所示序列的核苷酸片段。

进一步的，所述降低OPN基因表达的shRNA可剪切成含有如SEQ ID NO：6所示正义链以及SEQ ID NO：7所示反义链的siRNA。

优选的，所述茎环结构的序列可选自以下任一：UUCAAGAGA、AUG、CCC、UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU和CCACACC。

本发明第三方面公开了一种OPN基因干扰慢病毒载体，含有编码前述降低OPN基因表达的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA，并剪切获得如SEQ ID NO：6-7所示序列的siRNA。

所述OPN基因干扰慢病毒载体是将编码前述OPN基因shRNA的DNA片段克隆入已知载体获得，所述已知载体多为慢病毒载体，所述OPN基因干扰慢病毒载体经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒后，感染肿瘤细胞，进而转录出所述shRNA，通过酶切加工等步骤，最终获得所述OPN基因小干扰RNA，用于特异性沉默OPN基因的表达。