[发明专利]一种提高灵芝液体发酵菌丝体灵芝酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用乙酸进行两阶段发酵提高灵芝液体发酵菌丝体灵芝酸含量的方法。具体涉及一种在灵芝菌丝体液体发酵中，第一阶段促进灵芝菌丝迅速生长，第二阶段通过添加乙酸来诱导灵芝菌丝体提高灵芝酸含量。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝菌属真菌，是我国最著名的高等药用真菌。作为药物已有 2000多年的历史。目前在灵芝中研究较多的化学成分有多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃类、氨基酸多肽类、油脂类、微量元素等物质。灵芝酸是灵芝的主要活性成分之一，同时，也是主要药用成分。据文献报道，灵芝酸具有抗肿瘤、保肝作用，抑制组胺释放、血管紧张素转化酶等活性。而通过各种方法（如紫外诱变选育）促使得到更多的灵芝的有效活性成分，已成为国内外学者研究和关注的热点。提高灵芝酸含量，对提高灵芝的药用效果有重大的意义。

目前研究表明，茉莉酸甲酯、苯巴比妥、阿司匹林和铜离子都能够诱导灵芝酸合成。这些工作为研究灵芝酸生物合成的调控机制提供了很好的材料和表型。但是灵芝酸发酵产品作为食品和药品，必须考虑其发酵的安全性和经济性。茉莉酸甲酯本身价格昂贵，苯巴比妥是一种普遍性中枢神经抑制药，阿司匹林是一种解热镇痛药，铜离子是一种重金属。在灵芝酸发酵实际生产中，需要一种具有食品安全级别的，价格低廉的诱导物，而乙酸是食用醋的主要成分，具有食用安全性并且价格较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高灵芝液体发酵菌丝体灵芝酸含量的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种提高灵芝液体发酵菌丝体灵芝酸含量的方法，该灵芝液体发酵分为两个阶段发酵：第一阶段发酵促进灵芝菌丝迅速生长，第二阶段发酵通过向第一阶段发酵得到的发酵液中添加乙酸来诱导灵芝菌丝体提高灵芝酸含量。

上述的方法，包括以下步骤：

（1）向CYM培养基中接种灵芝液体菌种，在温度28~30℃，转速120~150 r/min条件下，进行第一阶段发酵，发酵时间为120~168小时；

（2）第一阶段发酵结束后，向发酵液中添加乙酸，继续进行第二阶段发酵，发酵时间为8~48小时。

所述乙酸的添加浓度为2 mM~14mM；优选为5 mM~14mM。

所述液体菌种的接种量为CYM培养基体积的3%~15%。

1升所述CYM培养基的配方为：麦芽糖10克，葡萄糖20克，酵母提取物2克，蛋白胨2克，七水硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，用水定容至1升，115℃灭菌25~40分钟。

本发明的提高灵芝液体发酵菌丝体灵芝酸含量的方法，在灵芝菌丝体液体发酵时添加乙酸来诱导灵芝产生更多的灵芝酸。所使用的诱导剂乙酸安全，且价格低廉，可显著提高灵芝酸的产量。

本发明的有益效果

通过本发明的方法，可显著提高灵芝菌丝体液体发酵时灵芝酸含量，且安全可靠，方法简单，成本低廉，与常规培养方法相比采用本发明方法可使液体发酵的灵芝菌丝体中灵芝酸的含量达到2.77~5.74 mg/100 mg DW，相对于比较例灵芝酸含量2.17 mg/100 mg DW，提高27.6 %~156.2 %。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步详细说明：

实施例一

1. 配置CYM培养基，配方为：麦芽糖10克，葡萄糖20克，酵母提取物2克，蛋白胨2克，七水硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1克，用水定容至1升，灭菌条件为115℃灭菌30分钟。

2. 以5 %的接种量向配置好的CYM培养基中接入灵芝液体菌种，在温度28℃，转速150 r/min条件下，进行第一阶段的发酵，发酵时间分别为128，136，144，152，160，168小时。

3. 分别在第一阶段发酵结束后，在无菌条件下分别向发酵液中添加最终浓度为5 mM的乙酸，进行第二阶段发酵。