[发明专利]孔雀石绿ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种孔雀石绿ELISA检测试剂盒，包括：SPG蛋白、包被缓冲液、封闭液、孔雀石绿抗体、偶联有HRP的孔雀石绿、显色剂和终止剂。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有HRP的孔雀石绿的制备方法为：

将羧基隐性孔雀石绿用四氯对苯醌转化为孔雀石绿，加入抗坏血酸，所得产物与NHS、EDC混合，其中所述羧基隐性孔雀石绿与NHS、EDC的摩尔比为0.8-1：0.8-1：0.8-1，搅拌得混合溶液，将所述混合溶液加入至HRP水溶液中。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述孔雀石绿抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包含孔雀石绿标准品。

5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述显色剂为过氧化氢与四甲基联苯胺混合液或过氧化脲与四甲基联苯胺混合液。

6.一种孔雀石绿检测方法，利用如权利要求1至5中任一项所述的ELISA检测试剂盒进行检测检测，包括以下步骤：

S01、将SPG蛋白与包被缓冲液混合，得包被混合液并在固相载体上孵育，孵育后去除液体；

S02、向步骤S01获得的固相载体上加入封闭液并孵育，孵育后去除液体；

S03、向步骤S02获得的固相载体上加入孔雀石绿抗体并孵育，孵育后去除液体；

S04、向步骤S03获得的固相载体上加入待测样品，同时加入偶联有HRP的孔雀石绿，孵育后去除液体；

S05、向步骤S04获得的固相载体上加入显色剂，显色后加入终止剂。

7.如权利要求6所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于，所述固相载体由聚苯乙烯、纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯、聚丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶或琼脂糖凝胶制成。

8.如权利要求6所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于，所述固相载体为酶标板。