[发明专利]利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法有效
| 申请号： | 201310350401.5 | 申请日： | 2013-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN103421901A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 苏松坤;潘娇;刘小彦 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 林文弘;蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 蜜蜂 ssrbeta 基因 荧光 定量 pcr 技术 鉴别 蜂王浆 产量 性能 方法 | ||
1.一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于鉴别方法如下：
（1）蜜蜂取样：从被考察蜂群中，每群分别采集30只哺育蜂；所述哺育蜂指蜂群中哺育幼虫的工蜂，即6－12日龄的工蜂；
（2） 蜜蜂头部RNA提取及cDNA合成：提取所采集哺育蜂头部的RNA，反转录获得cDNA；
（3）引物设计：设计合成的引物序列如下：
Primer-F：5’- ataggatttttgctggctggt-3’
Primer-R：5’- tacatttcttcgcatccatc-3’；
（4）荧光定量PCR检测：以稀释后的蜜蜂头部cDNA为模板， 以Primer-F和 Primer-R为引物，进行荧光定量PCR；选用蜜蜂头部的GAPDH为内参基因，采用2-△△ct 方法计算蜜蜂SsRbeta基因的表达量；在每个蜂群样本的每次qRT-PCR反应中均重复多次，取多次重复的平均值为蜜蜂SsRbeta基因的最终表达量，最终表达量越高，则該蜂群的蜂王浆产量性能越好；所述2-△△ct为蜜蜂SsRbeta基因的相对表达量，其中△△Ct = (Cttarget-CtGAPDH) treatment - (Cttarget-CtGAPDH) control。
2.根据权利要求1所述的一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于所述荧光定量PCR的反应体系为：总体积为20ul，内含SYBR GreenⅠ 10ul，Rox 0.4ul，Primer-F 0.4ul，Primer-R 0.4ul，cDNA 2ul，DEPC水补足到20ul。
3.根据权利要求1所述的一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于所述荧光定量PCR的反应条件如下：预变性 95℃，30s，PCR反应40 cycles，95℃，5s，61℃, 31s，溶解曲线 55℃，20s。
4.根据权利要求1所述的一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于所述蜂头部RNA提取及cDNA合成，采用TRizol方法提取RNA，采用反转录试剂盒完成cDNA的合成。
5.根据权利要求1所述的一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于所述稀释后的蜜蜂头部cDNA，即用DEPC水将蜜蜂头部cDNA稀释 6倍体积。
6.根据权利要求1所述的一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法，其特征在于所述在每个蜂群样本的每次qRT-PCR反应中均重复多次，其重复次数为3次。
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