[发明专利]番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测方法、引物组及其应用有效
| 申请号： | 201310351007.3 | 申请日： | 2013-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN103436636A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 李战彪;秦碧霞;蔡健和;徐鹏超;韦学平;周文亮;林北森 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530007 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番茄 环纹 斑点 病毒 rt lamp 检测 方法 引物 及其 应用 | ||
1.番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测引物组，其特征在于包括外侧引物对F3和B3、内侧引物对FIP和BIP，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.4的碱基序列。
2.一种番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括A试液，A试液为LAMP反应体系，含有RT-LAMP Mix（2×）、AMV-Bst混合液、RNase-Free Water、RT-LAMP检测引物组。
3.根据权利要求2所述的番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于该试剂盒每剂A试液含RT-LAMP Mix（2×）12.5μl、AMV-Bst混合液1.5μl、RNase-Free Water2.8μl、RT-LAMP检测引物组6.2μl，其中FIP和BIP引物各2.5μl，终浓度均为1μM；F3和B3引物各0.6μl，终浓度均为0.25μM；所述引物F3、B3、FIP和BIP分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.4的碱基序列。
4.根据权利要求3所述的番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括B试液和C试液；B试液含番茄环纹斑点病毒RNA，作为阳性对照；C试液为去离子水，作为阴性对照。
5.一种番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测方法，其特征在于：利用RT-LAMP检测引物组，在60-63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应30-120min，扩增完成后80℃再反应10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染色，鉴定植株样品是否感染番茄环纹斑点病毒；所述RT-LAMP检测引物组包括外侧引物对F3和B3、内侧引物对FIP和BIP，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.4的碱基序列。
6.根据权利要求4所述的番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测方法，其特征在于：所述外侧引物对与内侧引物对的浓度比例为1:4。
7.根据权利要求5所述的番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测方法，其特征在于：所述外侧引物对与内侧引物对的浓度分别为0.25μM和1μM。
8.根据权利要求4所述番茄环纹斑点病毒RT-LAMP检测方法在烟草、辣椒、番茄或杂草上的应用。
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