[发明专利]口蹄疫病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒有效
申请号: | 201310351271.7 | 申请日: | 2013-08-13 |
公开(公告)号: | CN103408641A | 公开(公告)日: | 2013-11-27 |
发明(设计)人: | 董春娜;齐鹏;肖进;栗利芳;王楠;巴利民;宋芳;张蕾;周强;郑应华 | 申请(专利权)人: | 中牧实业股份有限公司 |
主分类号: | C07K14/09 | 分类号: | C07K14/09;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/545 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;王慧凤 |
地址: | 100070 北京市丰台*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 口蹄疫病毒 结构 蛋白 抗体酶 免疫 检测 试剂盒 | ||
1.口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽,为由序列表中序列1所示的多肽或者序列表中序列2所示的多肽。
2.一种口蹄疫病毒结构蛋白抗体酶联免疫检测试剂盒,包括口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽包被的酶联反应板和酶标记抗抗体;所述口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽为由序列表中序列1所示的多肽和序列表中序列2所示的多肽组成的混合多肽。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述序列表中序列1所示的多肽和序列表中序列2所示的多肽的质量比为0.5-2.0:1,优选为1:1。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶;所述酶标记抗抗体为酶标记兔抗猪IgG,所述酶标记抗抗体优选为辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG。
5.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述酶联反应板为可拆卸96孔酶标板;所述口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽为化学人工合成得到。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于:所述口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽包被的酶联反应板的获得方法是将所述口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽溶于100μl的pH9.4的碳酸盐溶液,然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板,每孔50ng抗原,在37℃放置2-4小时,再4-8℃下放置过夜使多肽抗原与酶联反应板充分结合,然后按照300μl/孔加入含有1g/100ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液,37℃封闭处理1-2小时,洗涤后甩干,待酶联反应板干燥后4℃密封保存。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中还含有显色液和终止液;当标记酶为辣根过氧化物酶时显色液由显色液A液和显色液B液组成,所述显色液A液为含0.05%过氧化氢尿素的柠檬酸磷酸盐缓冲液,所述显色液B液为0.02mg/ml的四甲基联苯胺溶液;当标记酶为碱性磷酸酶时,显色液为4-硝基酚磷酸盐缓冲液;所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括阴性对照血清、阳性对照血清;所述阴性对照血清为无口蹄疫抗体的正常猪血清;所述阳性对照血清为以所述口蹄疫病毒结构蛋白VP1抗原表位多肽为免疫原免疫猪得到的血清;所述试剂盒还包括样品稀释液和浓缩洗涤液;样品稀释液为含有3g/100mlBSA的0.15M、pH为7.4的PBS缓冲液;浓缩洗涤液:0.01M,pH7.4,含有体积百分浓度为0.8%~1.2%的Tween-20和0.05g/100ml叠氮钠防腐剂的磷酸盐缓冲液。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的试剂盒,其特征在于:所述口蹄疫病毒为猪O型口蹄疫病毒。
10.权利要求1-9的试剂盒在制备检测是否感染动物口蹄疫病毒病的试剂盒中的应用;其中,动物口蹄疫病毒病为猪口蹄疫病毒病;具体为猪O型口蹄疫病毒引起的猪口蹄疫病。
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