[发明专利]一种评价大菱鲆变态反应期营养状态的方法

说明书

技术领域

本发明属于海水鱼类养殖评价技术领域，具体涉及一种评价大菱鲆变态反应期营养状态的方法。

背景技术

大菱鲆（Scophthalmus maximus）是当前欧洲的重要海水养殖鱼类之一，自1992年大菱鲆被引进中国以来，在水产科研工作者和养殖企业的共同努力下，大菱鲆在工业化养殖领域取得了重大成效，最高年产量达5万吨以上，年产值逾40亿元，从而成为我国水产养殖业一个新的经济增长点。

高质量的苗种培育是海水鱼类养殖的关键。大菱鲆仔鱼阶段经历了一个典型的变态过程，一只眼睛绕过头背部迁移到到另一侧，生活方式从浮游转变为底栖型。这种变态发育被认为是组织器官结构在胚胎期间确立后，通过细胞增殖、分化与凋亡等多种细胞学行为进行重新塑造的“二次发育”过程。该反应过程涉及剧烈组织器官重建，是大菱鲆苗种培育过程中死亡率最高的阶段。大量研究表明在变态期仔鱼大小一致情况下，营养状况是保证其顺利完成变态过程的关键因素，如果营养不足则明显影响其变态持续时间和变态后的表型，包括骨骼畸形和色素沉积不均匀等问题，这直接影响苗种培育经济价值。而目前对大菱鲆变态期营养状况尚无显著评价指标，养殖户基本上依据多年的经验对变态期仔鱼进行饲喂管理，对变态反应期营养状态缺乏系统科学研究。这直接影响变态期仔鱼饵料饲喂和管理方式改进，因此需要提供一种快捷有效的大菱鲆仔鱼变态期营养状况评价方法。

发明内容

本发明目的是提供一种评价大菱鲆变态反应期营养状况的方法，采用此方法可以弥补和完善现有技术的不足，解决现有的鲆鲽鱼类变态反应期营养状况检测方法中缺少综合评价。

本发明技术方案是通过对大菱鲆变态反应期，胰岛素样生长因子I（Insuline-lile growth factors I IGF-I）,脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（Ribonucleic acid，RNA）比值的检测，同时结合变态反应后相应的仔鱼畸形率和死亡率的测定，建立一种评价大菱鲆变态反应期营养状况的新方法，为大菱鲆变态反应期间仔鱼营养状况评价提供可靠的技术手段。

本发明首先提供一种判断处于变态反应期的大菱鲆营养状况良好的标准，所述的标准如下：IGF-I含量为105.07±13.16 U/gprot，且RNA/DNA比值为2.92±0.77。

本发明还提供一种评价处于大菱鲆变态反应期营养状况的方法，步骤如下：

1)将处于变态期的大菱鲆的组织样品DNA 和RNA，测定DNA和RNA的量，并计算 RNA:DNA的比值；

2)取与步骤1）来自同一个体的组织样品用生理盐水研磨制备成10%组织匀浆，离心取上清，测定IGF-I含量；

3）将每个样品按步骤1）和步骤2）重复三次或以上，RNA:DNA的比值及IGF-I含量的结果取平均值，与上述的标准进行比较；当IGF-I含量为105.07±13.16 U/gprot，且RNA/DNA比值为2.92±0.77时确定处于变态反应期的大菱鲆营养状况良好。

本发明提供一种检测大菱鲆变态反应期营养状态的方法，当大菱鲆变态反应期仔鱼IGF-I含量在105.07±13.16 U/gprot，且RNA/DNA在2.92±0.77时，变态反应后仔鱼畸形率最低，存活率最高，此时仔鱼营养状态最佳，符合生产的要求。当检测的变态反应期仔鱼IGF-I和RNA/DNA不在上述范围内时，所检测的仔鱼营养状况并没有处于最佳的质量范围，需要及时调整饲养管理方式。

本发明针对仔鱼变态期核酸检测，结合变态反应后仔鱼存活率和仔鱼畸形率的验证，减少了外界环境因子（因素）的影响，客观准确的反应了仔鱼变态反应期间营养，所用设备简单，价格低廉，可节省时间和成本。

附图说明

图1：大菱鲆变态期RNA/DNA的比值变化图；

图2：大菱鲆变态期结束后仔鱼死亡率和畸形率的变化图；

图3：大菱鲆变态期仔鱼死亡率和畸形率变化图。

具体实施方式

大菱鲆仔鱼变态反应在孵化后20天开始，36天结束。0-20天为变态前期（Pre-metamorphic phase），20-35天为变态期(Metamorphosis)，35天以后为变态后期(Post- metamorphic phase)。而本发明的方法正是用于检测处于变态期(Metamorphosis) 的大菱鲆仔鱼的营养状况进行评价。

本发明的方法，包括有如下的步骤：